中性纤维素酶一般在26-31℃条件下为适宜，温度低于26℃高于35℃纤维素酶会失去活性。
中性纤维素酶反应和一般酶反应不一样，其重要的区别取决于纤维素酶是多组分酶系，且底物构造极为繁杂。因为底物的水不溶解性，纤维素酶的吸附功效代替了酶与底物形成的ES物质全过程。纤维素酶先非特异地吸附在底物纤维素上，然后在几类成分的协同效应下将纤维素转化成葡萄糖水。
中性纤维素酶取两支干净试管编号为甲~乙，在两支试管中分别加入等量的含纤维素酶的适宜pH缓冲溶液和适宜的pH缓冲液。然后再各加入相同的滤纸条，在相同的时间内观察滤纸条消失的情况。