癌组织原位杂交实验步骤:
1. 将准备做原位杂交的样本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2. 玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。
3. 石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4. 暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
点对点酵母双杂交验证实验流程
1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测;
2、共转化:分别将诱饵/捕获质粒(pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey)、阳性对照质粒(pGBKT7-p53/pGADT7-T)、阴性对照质粒(pGBKT7-Lam/pGADT7-T)分别共转到Y2H Gold感受态细胞中,涂布于DDO平板培养;
3、点板验证:分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍,然后点板到TDO/X/A和QDO/X/A固体培养基进行验证;
4、实验数据与报告整理。
以上信息由专业从事植物组织RNA原位杂交检测技术服务的科锐诺于2024/7/15 11:10:33发布
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