外泌体分离提取方案。主要方案包括：
1、差速超1速离心法；
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品；
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法；
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品；
3、超滤提取法；
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法，做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种，其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似，电镜下，显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中，通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括：透射电镜（形态鉴定）、NTA检测（粒径及浓度鉴定）、WB（分子标志物）。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一，可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好，纯度较高的外泌体样品，粒径分布在30-150nm，原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量，对每一个样品，都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日，可当天到样当天出结果。
外泌体电镜检测：外泌体是细胞外囊泡的一种，其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似，电镜下，显示出典型的茶托状超微结构。
透射电镜作为鉴定外泌体的金标准，一直是科锐诺生物主营的业务之一。透射电镜点分辨率可以达到0.1nm，非常适合用来观察外泌体类囊泡。客户只需要寄送新鲜或者冻存的外泌体样品，我们负责从制片到观察的全套检测服务。经过多年实操与研发经验，科锐诺已经熟练掌握外泌体电镜检测。做过的样品来源包括：常规细胞上清、外周血、尿液、脑脊液、肺泡灌洗液、组织提取液、乳液、汗液等来源的外泌体。分离方法包括：PEG沉淀法、蔗糖密度梯度离心法、差速超1速离心法、色谱柱法、亲合法、超滤法、切向流、微流控等。对于不同来源，不同方法的样品，实验前，会进行详细沟通及结果预估。结合NTA数据，电镜效果非常可靠且可控。 测试周期为3-7个工作日。
实验室采用Zetaview（品牌：Particle Metrix）进行外泌体浓度粒径测试服务。其方法即纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA），原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一；相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。Zetaview包含的微电泳技术，也可进行zeta电位的检测。
目前配备为488nm波长的激光器，且搭配对应的滤光片，可以测量荧光抗1体标记的外泌体。
抗原提呈中外泌体的作用
树突状细胞是免1疫系统中分泌外泌体活跃的细胞。树突状细胞是抗原提呈细胞的一种，能通过吞噬入1侵体内的细菌等异物，在切断抗原肽后，与 MHCⅡ类分子结合并提呈在细胞表面来激1活T细胞。细胞内的抗原肽利用MHCⅠ类分子提呈，树突状细胞分泌的外泌体携带MHCⅠ类和Ⅱ类分子，它们分别与抗原特异性CD8+ 细胞杀伤性T细胞、CD4+ 辅助T细胞的T细胞受体结合，在远离树突状细胞处也可以激1活T细胞。
以上信息由专业从事外泌体测序服务的科锐诺于2024/7/29 8:36:33发布
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