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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下,考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合,导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm,同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合,测量在595 nm处的吸收值,在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下,蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色,da光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,xaio可测2.5μg/mL蛋白质,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
亮蓝
亮蓝,又名食用蓝色1号(日本)、食用蓝色2号,属水溶性非偶氮类着色剂。分子式C37H34N2Na2O9S3,相对分子质量792.86。亮蓝为食用蓝色色素,属于人工合成色素,是由邻磺酸与N--N- (3-磺基苄基)-经缩合、氧化而制得的。属于偶氮类化合物。可在食品、药品、化妆品等行业中作着色剂用。食品行业中适用于糕点、糖果、饮料等的着色。
中文名称
亮蓝
性质
带有金属光泽的红紫色颗粒或粉末
特点
无臭,水溶液呈蓝色
别名
酸性艳蓝G
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基本介绍
中文名:亮蓝
别名:酸性蓝 90;酸性艳蓝G;亮蓝;考马斯亮兰G250;考马斯亮蓝G250;Brilliant Blue鍳;亮蓝G;考马斯亮蓝G-250生物染色剂
英文名:Acid Blue 90
化学式:C47H48N3NaO7S2
CAS号:6104-58-1
MDL:MFCD00012141
摩尔质量:854.02
外观:带金属光泽的深紫至青铜色颗粒或粉末
亮蓝易溶于水,呈绿光蓝色溶液,溶于乙醇、甘油、丙二醇。耐光、耐热性强。对柠檬酸、酒石酸、碱均稳定。
1.用途:一种偶氮型酸性染料。主要用于食品、饮料着色,也用于羊毛、蚕丝的染色及制造色淀。水溶性合成色素,鲜艳的嫩黄色,广泛用于冰淇淋、雪糕、果冻、酸奶、饮料、罐头、糖果包衣等的着色。
根据中国《食品添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)规定:用于高糖果汁(味)或果汁(味)或果汁(味)饮料、碳酸饮料、配制酒、糖果、糕点上彩装、西瓜酱罐头、青梅、虾(味)片、渍制小菜、红绿丝,使用量0.1g/kg;用于冰淇淋,使用量0.02g/kg。用于植物蛋白饮料、乳酸菌饮料,用量0.05g/kg。
以上信息由专业从事亮蓝供应商的富舜新材料于2024/8/5 9:14:43发布
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