实验步骤

使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。

快速加入试剂至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各个微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。

9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。

10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以确保没有洗涤液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。

15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。

武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等。

一、高l效、灵敏、特异的抗l体；二、稳定的重复性和可靠性；三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；四、适用血l清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；五、节省实验经费。

elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。
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固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙l烯、聚苯乙l烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙l烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。