PCR实验室各区功能及主要设备
试剂准备区:主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。
扩增区:主要进行DNA扩增。此外,已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有:扩增仪、冰箱、离心机、加样器等。
PCR实验室又叫基因扩增实验,PCR是聚合酶链式反应简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA,可以看作生物体外的特殊DNA。通过DNA基因追系统,能迅速掌握生物体内的病毒含量,其***度高达纳米级别。
PCR实验室注意事项——试剂储存和准备区
贮存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区,不能经过扩增检测区,试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区,应当保存在标本处理区。
PCR实验室注意事项——扩增区
为避免气溶胶所致的污染,应当尽量减少在本区内的走动。必须注意的是,所有经过检测的反应管不得在此区域打开。
PCR实验室布局
PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有***走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。
PCR实验室工作基本原则
工作结束后,必须立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。
PCR实验室注意事项
几个区域的大小设置情况,试剂准备区、扩增区、扩增产物分析区,空间可以相对小一些,样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱,空间应大一些。
PCR实验室注意事项——扩增产物分析区
用过的吸头也必须放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理,如焚烧。由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,故应当注意实验人员的安全防护。
PCR实验室注意事项
试剂准备区、样品制备区设紧急洗眼器,以保证操作人员的安全。PCR实验室没有严格的净化要求,可以根据用户的使用情况和资金的投入选择。
PCR实验室布局
实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。
PCR实验室注意事项——扩增产物分析区
核酸扩增后产物的分析方法多种多样,如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。
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