PCR实验室工作基本原则
工作结束后,必须立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。
PCR实验室通风系统及压力控制
各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。
PCR实验室注意事项——试剂储存和准备区
贮存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区,不能经过扩增检测区,试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区,应当保存在标本处理区。
PCR实验室注意事项——扩增产物分析区
核酸扩增后产物的分析方法多种多样,如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。
PCR实验室注意事项——标本制备区
为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在危险性的材料,必须在生物安全柜内开盖,并有明确的样本处理和灭活程序。
PCR实验室布局
实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。
PCR实验室注意事项——扩增产物分析区
本区是主要的扩增产物污染来源,因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时,必须使用洗板,废液必须收集至1 mol/L HCl中,并且不能在实验室内倾倒,而应当至远离PCR实验室的地方弃掉。
PCR实验室装饰
实验室围护结构应牢固、气密性好;所有阴阳角宜采用圆弧过渡;墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒;地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪,材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
PCR实验室工作基本原则
实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
PCR实验室各区功能及主要设备
试剂准备区:主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。
工作结束后,必须立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。
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