转染试剂是一种新型高1效的阳离子聚合物。它可以与核酸(包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸)相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内,适用于大部分真核细胞的细胞转染。
转染效率较高,ABclonal 选取多种常见细胞系(包括 HEK293T、HCT116、HeLa、A549、C6、HEK293F 等),分别使用 HighGene 转染试剂和市面常规转染试剂产品进行细胞转染
1.以 24 孔细胞板转染实验为例,推荐一次(即每孔)转染的低内毒0素质粒 DNA 用量为 1~2μg、转染试剂用量为 3~5μl(请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化),质粒和转染试剂可用无菌生理盐水稀释。
2.QuickShuttle 经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试,虽然在实验中推荐使用 DMEM,但有实验结果表明 M199 能够显著增强 QuickShuttle 对 Vero 细胞和 293FT 细胞的转染效果,因此可尝试使用不同培养基对转染条件进行优化。
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博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
注意事项:
1. 质粒 DNA:请用能够去除内毒0素的方法制备高质量的质粒 DNA。
2. 稀释液:0.85%(W/V)生理盐水,用低内毒0素纯水配制,高压消毒或除0菌过滤。
3. 培养基:经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试,推荐使用含 5~10%牛血0清的DMEM,若转染效果不理想可尝试其它培养基。
4. 以 24 孔细胞板转染实验为例,推荐每孔低内毒0素质粒 DNA 用量为 2μg、转染试剂用量为 3~5μl,请在正式实验前根据不同培养基用报告基因进行优化。
5. 立传立转要求使用生长旺盛的细胞,即细胞生长至 80-90%成片或刚长满。若使用生长过老的细胞,将明显影响立传立转的效率。
6. 立传立转对细胞状态要求较高,如果转染效果不理想,可按 QuickShuttle-Enhanced 的转染方法(见本说明书第 4 页),在细胞贴壁后进行标准转染操作。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
磷酸钙沉淀法
磷酸钙沉淀法师基于磷酸钙-DNA复合物将DNA倒入真核细胞的转染方法。磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与ba细胞表面的结合。当核酸以磷酸高-DNA复合物的形式出现时,可使DNA附在细胞表面,利于细胞的吞入摄取,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内。进入细胞的DNA仅有1%-5%可以进入细胞核中,其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合,在细胞中进行稳定表达,基因转导的频率约为10-4,这项技术能用于任何DNA导入哺乳动物细胞进行暂时性的表达或长期的转化研究。
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