蛋白结晶板实验研究

大分子生物药以晶体形式作为给药的方式具有稳定性高,有效成分浓度高以及容易实现的可控性释放等许多优点.然而,,截至2004年的150多种生物药中,以晶体为其主要的生产和销售形态的只有胰岛素.造成这种情况的主要技术原因是因为蛋白质结晶和小分子结晶相比具有更为复杂的结晶环境和影响因素,大规模生产蛋白质晶体在方法和技术上还很不成熟。

传统结晶板蛋白质晶体板比较

在20℃时虽然微流控芯片上的结晶条件数少于24孔结晶板(67 vs 94),但主要是嗜热菌蛋白酶的结晶条件数显著减少,其他4种蛋白在两种方法上均有相近的结晶条件数,表明微流控芯片能以接近24孔结晶板的效率进行蛋白质结晶筛选.但是,在4℃时微流控芯片与24孔结晶板有60%的结晶条件不同,20℃时有90%的结晶条件不同,这表明目前的这种微流控芯片还不能直接代替传统的24孔结晶板,它可以作为蛋白质结晶筛选时的一种补充方式。

蛋白质晶体板相互作用

蛋白质分子的结构层次蛋白中的多肽链往往不是一个如图4图4所示完全伸展的链。L.C.鲍林和R.B.科里曾由氨基酸、小肽和有关化合物晶体结构的测定中归纳了肽键的键长、键角等。链中肽键N-C的键长为1.32埃，具有40%的双键成分，与周围四个键是共面的，且N-H和C=O具有反式构型。肽键因具双键成分而无旋转的自由，但它周围的每个Cα原子与相邻两个肽键中的氮和碳原子所形成的Cα-N和Cα-C单键都具有较大的回旋余地，从而一个多肽键可能存在于不计其数的构象或立体结构中，其中有些构象使未成键原子间形成较多较强的氢键并产生其他能使整个分子趋于稳定的相互作用。

蛋白结晶板

检测结果表明,经修饰的聚微孔板化学连接蛋白质结合率比物理吸附高出5~10倍,在-4℃环境中存放6个月活性降低小于15%。灵敏度和稳定性显著提高。本文制备的功能化聚微孔板具有使用方法简便、快捷、污染小、成本低的特点,有广阔的应用前景。蛋白质是水产品的主要组分,其含量测定在水产品加工及研究等方面应用极为广泛.目前,各蛋白含量快速测定方法通常是在试管中进行反应并应用分光光度计测定,其操作过程较繁琐,分析大批量样品时效率低,上述缺点在高通量筛选、检测等场合尤为突出。