反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质？

TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。

首先，冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和乙腈，药品实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是很简单、有效的。

其次，如果你的药品的分装量不大的话(<100ug)，建议你用离子交换层析，尽量装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，考虑稀释，尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成TFA盐，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸，再干燥后形成盐酸盐。

制备色谱柱如何测柱效？

可以选择几种物质，苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流动相一般用65-80%的甲醇/水，测定后根据保留时间计算塔板数。由于制备色谱的管路死体积一般比较大，很难得到和供应商相同的柱效。建议在制备柱开始使用时在自己的色谱上测一下柱效，然后定期检测柱效进行以进行比较。

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工业制备色谱

用于制备和生产的大规模生物分离技术所面临的问题是:如何在不破坏目标蛋白质的生物活性的前提下(温和的条件)，以很高的识别性，以及较高的分离能力和收率，经济有效地从稀溶液中提取、分离、纯化目标产物。吸附通常可以在常温、水相、适当的pH、离子强度、避免使用等有害的化学试剂等温和的条件下操作，液相色谱具有很高的分离性能，适合于生物分离过程的要求。

氧化铝基质的基本特点

氧化铝基质的一大特点是结构稳定，既可呈酸性，又可呈碱性。其次，铝元素在自然界含量丰富，仅次于氧元素和硅元素。在实际应用中，色谱用氧化铝填料主要应用于正相色谱、反相色谱和离子交换色谱。对于一些不饱和化合物，特别是芳香族化合物的保留效果较佳，有时还可用于分离芳烃类异构体。除此之外，氧化铝基质的pH耐受范围在3-12，可用于分离碱性化合物。以上这些特点使得氧化铝在某些领域能与硅胶形成良好的互补作用。