色谱分离基本原理
在色谱法中存在两相,一相是固定不动的,我们把它叫做固定相;另一相则不断流过固定相,我们把它叫做流动相。 液相色谱的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相(气体、液体)通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时,混合物中的各组分与固定相发生相互作用。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异,与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同,随着流动相的移动,混合物在两相间经过反复多次的分配平衡,液相色谱使得各组分被固定相保留的时间不同,从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合,实现混合物中各组分的分离与检测。
液相色谱系统特点
采用电子压力脉动抑制技术.取代了传统的机械缓冲器,有效的控制了流速的波动,使仪器的可靠性得到了进一步的提升,同时使系统的死体积降到了较小.
采用高精度直流伺服电机及编码器.给电子压力脉动抑制技术的实施提供了有力的保障,同时泵部件的体积和重量比步进电机减小很多,噪音基本得到消除.
输液结极模式为串联式.较并联式结很少两只单向阀,进而由单向阀故障所导致的系统故障率会减少50%,至于并联式结极交替供液所产生的流速波动同样需进行进一步的抑制,就并联式结极本身来讲并不能去除流速的波动. 不同的色谱柱阻尼下流动相的输送效率问题(单向阀的启闭、流动相的压缩性等)由相应的参数进行自动调整补偿,以保证色谱系统流速的稳定性. 可扩展功能枀为丰富,如四元高压梯度、四元低压梯度等.
流速范围可通过更换泵头及相应的系统参数进行调整.即可由10mL的分枂型轻松转换为50mL的半自备型.
液相色谱法的常见问题
样品准备是成功的关键;在将所有样品加载到自动进样器中之前,必须对所有样品进行过滤,这一点非常重要。当使用UHPLC时,如果不过滤样品,使用亚2微米颗粒的色谱柱进行高效分离时很容易发生阻塞,这一点就尤为重要。对于流动相也是如此,尤其是在使用缓冲区的情况下。
对于样品使用正确的进样溶剂或稀释剂至关重要,溶剂强度应等于或小于流动相起始条件的强度。如果使用太强的溶剂,则会观察到峰分裂和重现性差。如果自动进样器中使用的清洗溶剂太强,可能会观察到类似的问题。
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