HPLC概述

高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。

与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。

高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。

HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法是什么？

①样品量不足，解决办法为增加样品量

②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器

④检测器衰减太多。调整衰减即可。

⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数

⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。

⑦检测池中有气泡。解决办法为排气。

⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。

⑨流动相流量不合适。调整流速即可。

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

高效液相色谱仪

高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。

1.进样系统

一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作进样量是恒定的。

2.输液系统

该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。

3.分离系统

该系统包括：色谱柱、连接管和恒温器等。

4.检测系统

高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种

5.数据处理系统

该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。