制备型液相色谱分类

  制备型加压液相色谱，按照色谱柱和样品量的大小，分为：

（1）低压液相色谱；

（2）中压液相色谱；

（3）高压液相色谱；

（4）快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在一定交叠，没有统一、明确的标准。

本设备适用于快速制备复杂的混合物并获得高纯度、高回收率的产物。

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液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

液相色谱特点

①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

③高：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。

⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

⑥柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物

⑦样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。此外液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。

液相色谱的前世今生

早在古代罗马时期，人们已知道将一滴含有混合色素的溶液滴在一块布或一片纸上，通过观察溶液展开产生的同心圆环来分析染料与色素。实际上，这种简单操作已经采用了现代色谱学的基本原理。

19世纪中叶，德国化学家Runge对古罗马人的这种方法作了重要的改进，使其具有良好的重现性与定量能力，使盐溶液可在纸上分离；另外，化学家Goppalsr-oeder也在长条纸上分离了染料和动植物色素，这些研究标志着纸色谱法的建立，并逐步发展成为现代色谱技术。

1903年，俄国植物学家Tswett在华沙自然科学学会生物学会会议上发表了题为“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”中，提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法，这一工作标志着现代色谱学的开始。他将碳酸钙装入竖直的玻璃柱中，从顶端倒入植物色素的石油的醚浸取液，进一步采用溶剂冲洗，使溶质在柱的不同部位形成色带，首先向人们公开展示了采用色谱法提纯的植物色素溶液以及色谱图显示着彩色环带的柱管。Tswett将这种方法命名为色谱，管内填充物被称之为固定相，冲洗剂被称之为流动相。