制备色谱之DAC如何次次装出高柱效
动态轴向压缩柱(Dynamic Axial Compression Column,DAC)是工业化制备液相色谱分离的重要组成部分。当用户填装直径50mm以上制备柱时,传统预装柱很难装出高柱效和对称性,另外预装柱使用过程柱头容易塌陷,导致柱效变差,无法满足长期持续纯化生产。DAC在运行过程中,活塞可以提供持续压力,保证很优的填装柱床密度和稳定性,从而长时间保持很佳分离效果。相比于预装柱或弹簧柱,DAC可以轻松填装和拆卸,实现不同填料反复填装和轻松切换。有人说大柱子不用考虑柱效和对称性,只要能分出样品就行。现实是色谱就是靠柱效来分离的,柱效越高,分离越好,载量越大,收率和得率越高。
通常制备色谱方法开发在4.6mm,10mm或20mm的半制备柱,然后放大到DAC50或DAC100, DAC200,DAC300, DAC450, DAC600或DAC800。理论上多大规模的色谱柱都可以实现与分析柱或半制备柱同样的效率,在现实中,设计优良的DAC柱效甚至高于预装柱。只有柱效和对称性类似才能保证了分离方法的线性放大。
工业制备色谱
工业色谱又称制备色谱。利少{J组分的差速迁移而实现I.业规模混合物分离的方法它包括一个流动相(被分离的气相或液相)和一个固定相。两相在色谱柱r},进行接触,在色谱柱‘l,流动相沿固定相流动,由」几混合物中各组分被固定相滞流程度不同,它们随流动相移动的速度就不同,因而可使各组分.4.相分离。根据流动相的不}.可,可分为}L相色谱与液相色谱两类。根据固定相的类型,可分为吸附色谱、分配色iH离子交换色谱、亲和色潜‘排I}}L色谱五类。上业色谱可分离选择性系数非常接近的组分,它适用于热敏N}物质的分离,对制备高纯物质特别有效
蛋白质是具有一定构象(空间结构)的生物大分子:其一级结构是形成肽链的氨基酸序列(数目、种类、顺序),是蛋白质结构的基础;在一级结构水平上,部分肽链发生卷曲和折叠,形成其二级结构,这种卷曲和折叠是靠肽链中的羰基与氨基之间的氢键维持的:在二级结构的基础上,多肽链再盘绕和折叠,形成三维空间形态,即为蛋白质的三级结构:而蛋白质的四级结构是指同一蛋白质中各条肽链之间的相互关系。
蛋白质的特点使得其分离过程与传统化工分离过程有着极为不同的特点:(1)分离对象是具有特定的生物活性的生物大分子产品,分离过程设计中不恰当的物理和化学环境等(如温度、PH值、缓冲液选择、、搅拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白质分子结构发生改变,从而使之失活;(2)由于发酵液、细胞培养液或匀浆液中,我们所需要的目标产物往往存在于含有许多性质十分相似的杂质的稀溶液中,如何从这样一种复杂的稀溶液中经济有效地提取产物是生物分离技术面临的重大课题;(3)从卫生和安全角度出发,对于用基因工程产品,有着极高的纯度和同一性要求,对其中的有害杂质去除率要求极高,对分离设备材质和分离过程中引入的分离介质也有着严格的限制。
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