样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？

（1）了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质，通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。

（2）样品可能某种晶型难溶，这样可以加入其他溶剂以助溶。

（3）不是一定要用流动相来溶解样品，对溶解度差的样品，可以选择甲醇，THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO，对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱，一般不会影响峰型。

（4）可以固体上样。

制备色谱柱如何测柱效？

可以选择几种物质，苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流动相一般用65-80%的甲醇/水，测定后根据保留时间计算塔板数。由于制备色谱的管路死体积一般比较大，很难得到和供应商相同的柱效。建议在制备柱开始使用时在自己的色谱上测一下柱效，然后定期检测柱效进行以进行比较。

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反相色谱分离后，如何快速从流动相中得到产品？

可以考虑先在低温下，减压旋蒸除去其中的有机的溶剂，然后用萃取的方法把产品萃取出来，然后再低温再旋蒸，这样，就可以不将温度升得很高而得到产品。如果要直接蒸掉流动相，水泵的真空度要注意（要检查气密性），否则蒸水会很慢。一般比较好的泵在60～70度即可蒸掉水，如果泵的真空度不好，可能需要80～90度才行，这样容易暴沸导致样品损失。温度太高可能引起物质变性。

工业制备色谱

现代生物技术的迅速发展及其产业化对其下游过程，即生物技术产品(尤其是各种蛋白质)的分离纯化技术提出了迫切的需求。通过发酵和动、植物细胞培养等生成的目标产物需通过一系列的分离和纯化等步骤才能获得终的产品。通常，生物技术产品生产中分离提纯成本要占其生产总成本的40%~90%。在以小分子产品为主的传统发酵工业中分离成本要占总成本的60%左右，而以蛋白质为代表的现代基因工程产品则有时可高达90%左右。作为生物工程的一个组成部分，分离技术在其产品实现中起到重要作用。