液相色谱法概述

HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。

液相色谱

自动进样器

样品在进样前必须经过适当的预先处理，需要经过亚微米滤膜的过滤或者离心，防止样品中的微小颗粒堵塞管路，好使用流动相作为溶剂配制样品，所用溶剂应该对样品有较好的溶解性。

针座是喇叭口朝上暴露在空气中的，有时空气中的较大灰尘颗粒可能恰好落在针座的流路内而引起针座的堵塞。这时候可以尝试卸下针座，将它接在泵的出口上反冲，一般能解决问题。

如果经常使用缓冲溶液，除了泵头之外，ALS计量泵的柱塞及密封圈，六通阀的转子密封圈和定子密封圈应该定期清洗，防止有盐的颗粒磨损ALS一定要使用Agilent的样品瓶及瓶盖;使用不兼容的或者加工精度差的样品瓶及瓶盖会引起ALS故障率的增加及性能的降低。

正确的液相色谱仪使用方法

随着实验方法的大量开发和成熟，目前液相色谱在包括食品、药品、化工、生命、环境等领域内大量使用，其作为一种通用分析检测设备在高校、科研院所、医院、监管机构、工厂企业中广泛配置。为了提高液相色谱仪的工作效率，延长液相色谱仪使用寿命，应该如何正确的使用液相色谱仪！

1．检查溶剂托盘托盘上的溶剂是否足量，以溶剂液面超过过输液管过滤头5厘米以上为宜。

2．检查输液管内部有否气泡，若有，应及时通过排液阀排出。

3．对溶剂（针对项看是否需要补充溶剂）和样品进行处理，过滤，脱气。

4．打开主机电源，依次打开检测器，泵A，泵B，柱箱的电源

5．打开电脑，开启色谱工作站

6．先在工作站中开启活塞泵，以所需的流动相平衡系统（约需30min）

7．打开灯，等待系统基线走稳

8．开始进样检测

为什么液相色谱适合分析低沸点化学物质？

这个说法不能理解成液相色谱不适合分析高沸点物质。

其实这是因为气相色谱一般需要对物质进行加热，然后根据汽化温度（沸点）不同，物质先后进入检测器。检测器一般是氢火焰检测器为主。

如果一个物质沸点太低，那么很容易出峰非常快，和溶剂出在一起，在谱图前端，根本看不出来（如果你看过气相色谱图你就知道了）。

此时就需要用HPLC，因为HPLC分开物质依据的是物质和色谱柱填料的亲和力强弱，而不是沸点。

举个例子，如果我想要知道我一个样本中是否含有（沸点85℃），用气相色谱是非常困难的。因为沸点100℃以下的物质在GC里面出峰是极度困难的。

但是我如果用HPLC配合反相柱，此时就可以看得出来。

多说一点，实际上还有一些情况我不能用HPLC来分析，就是当一个化合物极性非常大或者极性非常小，此时我无论用正相色谱柱还是反相色谱柱，都会有一个问题，就是我的化合物要么出在前面和溶剂在一起，要么根本出不出来。

比如咪唑，咪唑的亲水性太强，我经常在HPLC反相柱里面分离不开，此时一般我要分析，就会借助GC（沸点256℃）