液相色谱法概述

液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

液相色谱根据分离机理的不同可分为：

?液固吸附色谱

?液液分配色谱

?离子交换色谱

?离子对色谱法

?分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)

(一)液-固吸附色谱

流动相为液体，固定相为固体吸附剂，根据物质吸附作用的不同来分离物质。

(二)液-液分配色谱

流动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱，是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行分离。一种液相为流动相，另一种是涂于载体上的固定相。

流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法称为正相分配色谱法。

流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法称为反相分配色谱法。

(三)离子交换色谱

(四)离子对色谱法

(五)分子排阻色谱法

为什么液相色谱适合分析低沸点化学物质？

这个说法不能理解成液相色谱不适合分析高沸点物质。

其实这是因为气相色谱一般需要对物质进行加热，然后根据汽化温度（沸点）不同，物质先后进入检测器。检测器一般是氢火焰检测器为主。

如果一个物质沸点太低，那么很容易出峰非常快，和溶剂出在一起，在谱图前端，根本看不出来（如果你看过气相色谱图你就知道了）。

此时就需要用HPLC，因为HPLC分开物质依据的是物质和色谱柱填料的亲和力强弱，而不是沸点。

举个例子，如果我想要知道我一个样本中是否含有（沸点85℃），用气相色谱是非常困难的。因为沸点100℃以下的物质在GC里面出峰是极度困难的。

但是我如果用HPLC配合反相柱，此时就可以看得出来。

多说一点，实际上还有一些情况我不能用HPLC来分析，就是当一个化合物极性非常大或者极性非常小，此时我无论用正相色谱柱还是反相色谱柱，都会有一个问题，就是我的化合物要么出在前面和溶剂在一起，要么根本出不出来。

比如咪唑，咪唑的亲水性太强，我经常在HPLC反相柱里面分离不开，此时一般我要分析，就会借助GC（沸点256℃）