恒温快速扩增试剂盒出现假阳性的结果,可能的原因有哪些?
如果在无模板对照中观察到假阳性结果,则通常是由污染引起的。我们建议区分试剂配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时,必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染,我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒,并使用新的扩增试剂(溶解剂等)。可能需要重复几次清洁,才能完全清除污染。
恒温扩增试剂盒常用酶简介
RPA相关酶
重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)是一种多酶协作的反应体系,详细原理可参考充满想象力的恒温扩增技术:RPA、RCA、SDA、HDA。该体系反应酶包含三种:重组酶:可与引物结合形成复合体,定位至与引物同源的靶序列,促使引物与模板结合,同时帮助DNA解链,以便启动扩增;单链DNA结合蛋白:可与被置换出的DNA单链结合,稳定单链结构;DNA聚合酶:如Bsu DNA聚合酶,用于DNA链合成,同时具有链置换功能。对于RNA模板,需在反应中加入逆转录酶形成RT-RPA体系;若利用标记探针进行检测,还需加入核酸酶对探针序列进行切割,常用核酸酶有核酸内切酶 IV(Endonuclease IV, nfo)和核酸外切酶 III(Exonuclease III, exo),或者可与CRISPS/Cas系统搭配使用。
恒温快速扩增试剂盒应在什么样的温度下应用?
规范的ERA扩增试剂盒通过配置可在37℃-42℃的温度范畴内实际操作。过高的温度会对反映管理体系造成不好的危害,由于酶会慢慢地丧失所有活性。针对RT试剂盒,大家提议用户在40℃下运作反映,由于逆转录酶在稍高温度下具备更高的活性。 立博泰业——很多年市场销售恒温快速扩增试剂盒,企业坚持不懈用户为造物主,想用户之所感,急用户之所急,以诚为本,注重信誉度,以商品求发展趋势,以品质谋发展,大家诚挚地热烈欢迎各位同仁协作共赢未来。
恒温扩增试剂盒设计及储存
荧光探针设计:
在上下游引物中间,设计- -段长度为46-52nt与目的片段互补的序列作为荧光探针;
探针序列不与特异性引物识别位点重叠,长度为46-52 nt ,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。
试剂盒储存:
运输条件:低温运输;
储存条件:储存温度≤-20°C ,避光保存,避免重压、反复冻融:
产品有效期: 12个月。
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