恒温快速扩增试剂盒应在怎样的温度下使用？

标准的ERA扩增试剂盒经过配制可在37℃-42℃的温度范围内操作。过高的温度会对反应体系产生不利的影响，因为酶会逐渐地失去全部活性。对于RT试剂盒，我们建议客户在40℃下运行反应，因为逆转录酶在稍高温度下具有更高的活性。

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恒温扩增试剂盒

原理概述：

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在恒温条件下（42 °C），特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链，反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。

产品特点：

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短（仅需30 mins）等优点，反应组分为干粉状态，操作简便，易于保存。

本试剂对设备要求低，金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。

恒温快速扩增试剂盒出现假阳性的结果，可能的原因有哪些？

如果在无模板对照中观察到假阳性结果，则通常是由污染引起的。我们建议区分试剂配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时，必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染，我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒，并使用新的扩增试剂（溶解剂等）。可能需要重复几次清洁，才能完全清除污染。

恒温快速扩增试剂盒常用酶原料有哪些？

逆转录酶逆转录酶又称反转录酶，是一种RNA介导的DNA聚合酶，其反应过程中体现出三种功能为：以RNA作为模板合成互补DNA链 (complementary DNA, cDNA)，形成RNA:cDNA杂交链；发挥RNase H活性，降解RNA:DNA杂交链中的RNA模板；以cDNA作为模板合成第二链DNA，形成双链DNA（如下图）。其中，RNaseH活性是逆转录酶的一个内在特性，可在合成过程中同时切割RNA:cDNA杂合链中的RNA模板，该特性可能降低逆转录效率，因此在实际应用中，常采用人工改造后的低或无RNase H活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有AMV和M-MLV，AMV分离自禽类成髓细胞瘤病毒(Avian Myeloblastosis Virus, AMV)，M-MLV逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠病毒(Moloney Murine Leukemia Virus, MMLV)，前者热稳定性优于后者，但AMV逆转录酶的RNaseH活性也更强，不利于长片段cDNA合成。市面上多使用经基因工程改造过的M-MLV逆转录酶，其热稳定性改进，可在50℃左右工作，同时RNase H活性进一步减弱，提高了其逆转录效率。