PCR革新技术-英国TwistDx Inc公司开发恒温扩增RPA

英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被称为是可以替代PCR的核酸检测技术，目前***新的等温扩增检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。

常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的适宜温度在37°C - 42°C之间，无需变性，在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。

据介绍，RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理，适用于无法提取核酸的实地检测。

RPA不仅可以对扩增产物进行终点检测，还可以对扩增过程进行实时监控，甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。

目前，TwistAmp? 试剂盒的扩增子长度在500bp以内。不过，经过特别优化的RPA扩增，也可以生成更长的扩增产物，或者减慢扩增速度(便于定量)，甚至在更低的温度下进行反应。

TwistDx试剂盒

2018年，TwistDx推出了一系列全新的液态重组酶聚合酶扩增 (RPA)试剂盒，这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成 DNA/RNA 扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。

TwistAmp??Liquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂，该形态对于在实验室执行 PCR 和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中，用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积，配制用于多次反应的预混液，或者以各种 RPA 组分比例进行实验以优化试验。

除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmp? RPA试剂盒这一旗舰产品，本次新推出的?TwistAmp? Liquid试剂盒是现场试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的RPA法（该方法有时甚至采用与PCR相同的引物）取代 PCR法，以及更容易地开发出定制的试验。

RPA是什么？

自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。

英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。

即用型RPA检测试剂盒

客户采用RPA技术，可以根据自身需求开发自己的检测方法。在不同开发阶段所提供的这些即用型试剂盒内含有一整套用于检测主要食物病原体靶标的通用RPA试剂组分，灵活易用。

TwistDx公司曾经开发出系列即用型RPA检测试剂盒。例如，TwistAmp? exo +试剂盒为用户提供了一个exo试剂盒，加上用于实时荧光检测的引物探针及阳性模板，该模板可与每次检测反应配合使用。TwistGlow? 沙门氏菌（即用型，可用于实时荧光检测）和 TwistFlow? 沙门氏菌（即用型，可用于终点侧流检测）试剂盒均为用户提供包含靶基因及内部质控引物探针反应组分、一个两步走的细胞裂解样本制备方法，以及可与每次试剂盒反应配合使用的模板。

目前，TwistDx公司在被雅培收购后，停产了部分产品，包括：TwistAmp Basic RT试剂盒、TwistAmp exo RT试剂盒、TwistAmp Liquid Basic RT 试剂盒和TwistAmp Liquid exo RT试剂盒、食品安全试剂盒（包括TwistAmp exo 弯曲菌属检测试剂盒（TwistAmp exo +Campylobacter）、TwistAmp exo 单核细胞***李斯特菌检测试剂盒（TwistAmp exo +ListeriaM）、TwistGlow?沙门氏菌检测试剂盒（TwistGlow?Salmonella）和TwistFlow 沙门氏菌检测试剂盒（TwistFlow?Salmonella ）共四种）。