RPA 的用途
以此为基础的TwistAmp⑧核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测该技术对硬件设备的要求很低,特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。
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恒温扩增技术
应用领域:广泛应用于临床诊断,食品安全检测,动物疾病检测等领域
技术特点:快速,特异,无需专门设备
类型:取代PCR的恒温核酸扩增技术,目前有应用前景的就是RPA技术,此外也有一些其他恒温扩增技术,主要包括:
1. 滚环核酸扩增( rolling circle amolification,RCA )
2.环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification,LAMP)
3.链替代扩增
4.依赖核酸序列扩增( nucleicacid sequence based amplification ,NASBA)
5.解链酶扩增( helix dependent amplification, HAD)
如何提高扩增曲线的可重复性?
A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板,不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同(未混匀的反应扩增效率不佳)。另外,在低温情况下存贮,重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以,20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体,不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足,在加入体系前,用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。
RPA是什么?
自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR,这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。
英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低,特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。
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