TwistDx

自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。近年来，等温扩增技术的兴起无疑是对PCR的巨大挑战。

等温扩增技术的基因快速诊断方法,涉及生物检测技术领域,具体是用体外生物检测试剂快速检测病原微生物的一种技术。

包括如下步骤:一、对被检样品进行预处理;二、包括目标靶基因数据库的建立;生物信息学的分析比较;基因组多态性的分型处理和简并碱基的运用,获得各种靶基因的特异性引物两对,分别与靶基因中的六个独立区域序列特异性匹配;三、进行等温扩增反应;四、分析判断结果。该方法的优点:不需特殊试剂与设备;高特异性;.灵敏度高;鉴定简便;用途广: 可用于食品、药品、化妆品等领域的质量控制和环境、水质等监测;用于医学临床诊断,用于代谢性疾病和遗传疾病的基因诊断。

RPA技术的基本原理

RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp? Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂，我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测，产物纯化后可用于下游研究。

在这个基础体系中添入不同的酶和探针，就可以实现多样化的RPA应用。举例来说，TwistAmp? exo结合了的exo探针技术和核酸外切酶III，能实现数据的实时读取，就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少，适合获得强荧光信号进行动力学分析，不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来，可以一步实现RNA模板的实时扩增。

TwistDx试剂盒

2018年，TwistDx推出了一系列全新的液态重组酶聚合酶扩增 (RPA)试剂盒，这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成 DNA/RNA 扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。

TwistAmp??Liquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂，该形态对于在实验室执行 PCR 和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中，用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积，配制用于多次反应的预混液，或者以各种 RPA 组分比例进行实验以优化试验。

除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmp? RPA试剂盒这一旗舰产品，本次新推出的?TwistAmp? Liquid试剂盒是现场试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的RPA法（该方法有时甚至采用与PCR相同的引物）取代 PCR法，以及更容易地开发出定制的试验。

即用型RPA检测试剂盒

客户采用RPA技术，可以根据自身需求开发自己的检测方法。在不同开发阶段所提供的这些即用型试剂盒内含有一整套用于检测主要食物病原体靶标的通用RPA试剂组分，灵活易用。

TwistDx公司曾经开发出系列即用型RPA检测试剂盒。例如，TwistAmp? exo +试剂盒为用户提供了一个exo试剂盒，加上用于实时荧光检测的引物探针及阳性模板，该模板可与每次检测反应配合使用。TwistGlow? 沙门氏菌（即用型，可用于实时荧光检测）和 TwistFlow? 沙门氏菌（即用型，可用于终点侧流检测）试剂盒均为用户提供包含靶基因及内部质控引物探针反应组分、一个两步走的细胞裂解样本制备方法，以及可与每次试剂盒反应配合使用的模板。

目前，TwistDx公司在被雅培收购后，停产了部分产品，包括：TwistAmp Basic RT试剂盒、TwistAmp exo RT试剂盒、TwistAmp Liquid Basic RT 试剂盒和TwistAmp Liquid exo RT试剂盒、食品安全试剂盒（包括TwistAmp exo 弯曲菌属检测试剂盒（TwistAmp exo +Campylobacter）、TwistAmp exo 单核细胞***李斯特菌检测试剂盒（TwistAmp exo +ListeriaM）、TwistGlow?沙门氏菌检测试剂盒（TwistGlow?Salmonella）和TwistFlow 沙门氏菌检测试剂盒（TwistFlow?Salmonella ）共四种）。