蛋白电泳

蛋白电泳的分子筛效应和电荷效应

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分子筛效应：

大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率 ，这就是分子筛效应。

电荷效应：

蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的高浓度蛋白质区，但由于每种蛋白质分子所带有效电荷不同，因而泳动率也不同，因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个区带。在进入分离胶时，电荷效应仍起作用。目前，PAGE连续体系应用也很广，虽然电泳过程中无浓缩效应，但利用分子筛及电荷效应也可使样品得到较好的分离，加之在温和的pH条件下，不致使蛋白质、酶、核酸等活性物质变性失活，也显示了它的***性。这种方式可以有效地使用电场，但在装置设计上有一些困难，如液体泄漏，用电安全和操作麻烦等问题。

蛋白电泳制胶

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制胶

将玻璃板洗净晾干，将厚板粘有边条的一侧与薄板重叠（薄板向外），放入制胶框内（如果放置困难可选择先放厚板再放薄板要求2块玻璃板底面对齐），将制胶夹胶框的卡锁转向外侧,将玻璃板固定。

用手捏紧制胶架上的固定夹，将整个制胶框置于制胶架上，松开固定夹,令卡块压住厚玻璃板,使玻璃板底面贴紧制胶架底部的密封垫。

向凝胶腔内缓慢注入配制好的聚丙烯酰胺凝胶(如灌制梯度凝胶需使用梯度混合器)，先灌注分离胶,待分离胶凝固后,再灌浓缩胶。   浓缩胶灌满后，插入样品梳，待30至45分钟凝胶完全聚合后，制胶完成。

蛋白电泳槽的凝胶置入与电泳

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a，将控制夹板呈打开方式放置于干净平整桌面上

b，将首块凝胶三明治以薄玻璃板向内方式放置于凝胶支撑架上，凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个，此时凝胶板相对中心有30 度夹角，放置首块胶时须小心确认控制夹板保持平衡状态不会翻倒，在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶，共有两块胶相对中心倾斜（注：凝胶板必须以薄玻璃板向内方式放置于控制夹板两侧，同时，控制夹板需要 2 块胶板组合形成功能组件，如果运行1 或 3 块胶时，须使用单胶堵板代替另一侧的凝胶）。不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。

c，用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色胶条，确保短玻璃板处在绿色胶条上部的凸起之下并压紧胶板，另一只手将控制夹板合拢在胶板上，使其锁定到位。

d，电泳槽下槽具有两个位置可放置两个电泳槽内芯：带插头电泳槽内芯在后，蘑菇头电泳槽内芯在前，如果只运行 2 块胶则只需用带插头电泳槽内芯，将其放在后部位置上使得红色正极与槽右侧的红色标记相对应，如需做 4 块胶，除放入带插头电泳槽内芯外，还要将蘑菇头电泳槽内芯放入前部位置，确认两者的红色正极与槽右侧的红色标记相对应（注意：位置和方向的错误会使上盖无法盖合）。LF-Mini3型小型垂直电泳槽技术参数：外型尺寸（L×W×H）：180×130×160mm凝胶板规格(L×W)：83×73mm样品梳：10/15齿，1。

e，将上盖盖在电泳槽下槽上，确认插头位置正确（上盖上的障碍物可以防止定位错误）。

f，将电泳槽导线的双插头认准正负极插入电泳电源插孔内，恒压 200V 是 SDS-PAGE 和多数 native PAGE 电泳的推荐条件。在 200V 电压条件下运行，SDS-PAGE 大约需要 35 分钟。

g，电泳完成后关断电源，拔出电源插头，移开上盖，小心取出电泳槽内芯，倒出缓冲液。为防止缓冲液漏洒，请在打开控制夹板前倒掉缓冲液。