转印电泳的一抗和二抗

转印电泳的一抗和二抗

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一抗孵育：将LG用稀释液稀释到适当的浓，在摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可以适当降低一抗稀释度或者延长一抗孵育时间）

洗膜：用PBST或者TBST洗膜5 X 5min，如果预实验中发现背景过高，可以增加洗膜时间或洗膜次数

二抗孵育：二抗是辣根过氧化物酶(HRP)标记的LG, 摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可适当降低延长二抗孵育时间）

洗膜：用PBST或者TBST洗膜3 X 10min

T：Tween-20（去污剂）

那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢？

那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢？

1. 玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损，这样玻璃板受损处则不再平整，液体会从这些部位漏出。这种情况下只能更换玻璃板，而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的，这种情况则需要一起更换。

有时由于清洗不到位，边条压片表面会有污物凸起，也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。

2. 两侧的夹扣变松，或有些厂家的夹扣为了防止漏液，设计的很紧，时间长之后，玻璃板被挤压变形，密封性下降。这样玻璃板也会从两侧漏胶。

3. 底座的胶垫老化、变形或错位，玻璃板底部会发生漏胶。

4. 桌面不平整，玻璃板上夹具时不容易放正，玻璃板安装到夹具上时是相对于底座橡胶垫倾斜的，这样玻璃板底部会发生漏胶。

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电泳技术

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带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。1807年，由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷德里克·罗伊斯（Ferdinand Frederic Reuss）较早发现。因此随着电压的上升，电泳分辨率反而下降，为了获得电泳分离DNA片段的所需分辨率，电场强度不宜大于15V/cm。1936年瑞典学者A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪 ，分离了3种球蛋白，创建了电泳技术。