核酸电泳染色液

核酸电泳常用染色液

1、溴化乙锭（ethidium bromide, EB）

较为常用的核酸荧光染料，可嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCI2中5min，使非结合的EB褪色，这 样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测单链DNA或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。以上内容由北京龙方科技为您提供，想要了解更多电泳槽的相关资讯，欢迎拨打图片上的热线电话。

2、吖啶橙（acridine orange, AO）：

吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。3，DNA变性电泳前请勿高温加热DNA链，以20mMNaClBuffer稀释DNA。

3、亚甲蓝（methylene blue）

可将RNA染成蓝色，但灵敏度不高，而且操作时间长。染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼可见，较低检测量为 250ng。

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电泳原理

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1、(分解)

---在外加直流电场的作用下,水在两极会发生电解反应。在阳极,形成H+极区,便于涂料沉积。

2.电泳(泳动、迁移)

阴离子树脂及OH-在电场作用下,向阳极移动,而阳离子向阴极移动的过程.

3.电沉积(析出)

在阳极被涂工件表面,阴离子树脂与阳极表面酸性离子作用,形成树脂沉积物而析出,沉积于被涂工件表面.

4.电渗(脱水)

工件表面上的涂膜具有多数毛细孔结构,水通过内渗透力从阳极涂膜中排渗出来,在电场作用下,引起涂膜脱水,而涂膜则吸附于工件表面,从而完成整个电泳过程.

5.ED离子交换原理

蛋白电泳槽的凝胶置入与电泳

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a，将控制夹板呈打开方式放置于干净平整桌面上

b，将首块凝胶三明治以薄玻璃板向内方式放置于凝胶支撑架上，凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个，此时凝胶板相对中心有30 度夹角，放置首块胶时须小心确认控制夹板保持平衡状态不会翻倒，在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶，共有两块胶相对中心倾斜（注：凝胶板必须以薄玻璃板向内方式放置于控制夹板两侧，同时，控制夹板需要 2 块胶板组合形成功能组件，如果运行1 或 3 块胶时，须使用单胶堵板代替另一侧的凝胶）。如果是RNA分子，就叫Nouthernblot，如果是蛋白质分子就是WesternBlot。

c，用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色胶条，确保短玻璃板处在绿色胶条上部的凸起之下并压紧胶板，另一只手将控制夹板合拢在胶板上，使其锁定到位。

d，电泳槽下槽具有两个位置可放置两个电泳槽内芯：带插头电泳槽内芯在后，蘑菇头电泳槽内芯在前，如果只运行 2 块胶则只需用带插头电泳槽内芯，将其放在后部位置上使得红色正极与槽右侧的红色标记相对应，如需做 4 块胶，除放入带插头电泳槽内芯外，还要将蘑菇头电泳槽内芯放入前部位置，确认两者的红色正极与槽右侧的红色标记相对应（注意：位置和方向的错误会使上盖无法盖合）。电泳槽附件主要有：凝胶玻璃板、加样梳、制胶器、凝胶托盘、电泳槽导线等，从用途和样品性质来说，电泳槽主要分为：蛋白电泳槽、蛋白转印电泳槽和核酸电泳槽三大类别。

e，将上盖盖在电泳槽下槽上，确认插头位置正确（上盖上的障碍物可以防止定位错误）。

f，将电泳槽导线的双插头认准正负极插入电泳电源插孔内，恒压 200V 是 SDS-PAGE 和多数 native PAGE 电泳的推荐条件。在 200V 电压条件下运行，SDS-PAGE 大约需要 35 分钟。

g，电泳完成后关断电源，拔出电源插头，移开上盖，小心取出电泳槽内芯，倒出缓冲液。为防止缓冲液漏洒，请在打开控制夹板前倒掉缓冲液。

转印电泳注意事项

一、功能概述

本产品可快速、高质量地转印小型凝胶，它可容纳2个凝胶转印夹，可同时转印两块小型凝胶。

1、一小时内转印2块10×7.5㎝凝胶；也可进行低强度的过夜转印。

2、电极丝相距4㎝可以产生强电场保证有效的蛋白转印。

3、具有颜色标记的转印夹和转印模块能够确保凝胶的正确定向。

二、注意事项

本产品内安装的铂金丝电极易断，使用中应小心操作，铂金丝不在保修范围之内，提醒客户清洗电泳槽时细致观察小心触碰！

附：缓冲液配比（推荐）

5X电泳缓冲液：15.1g Tris+94.0g Gly+5.0g SDS 配成1L

转移缓冲液：3.03g Tris+14.42g Gly+200mL CH3OH 配成1L