琼脂糖凝胶电泳原理
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DNA分子在常规的电泳缓冲液(高于等电点的pH溶液)中5’磷酸的氢离子解离被中和,而只剩磷酸根离子,故带负电,因而在电场中向正极移动(电荷效应)。又由于琼脂糖凝胶具有分子筛效应,在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子本身的大小和构型。因此琼脂糖凝胶电泳不仅可分离不同分子量的DNA,也可以分离分子量相同、但构型不同的DNA分子,如质粒三种构型。目前,电泳技术已经广泛应用于基础理论研究、临床诊断及工业制造等方面。
电泳技术的种类
电泳技术的种类很多。根据有无固体支持物,可分为两大类,即界面电泳和区带电泳。界面电泳是指在溶液中进行的电泳,没有固体支持物。当溶液中有几种带电粒子时,通电后由于不同种类粒子泳动速度不同,在溶液中形成相应的区带界面,但区带界面由于扩散而易于互相重叠,不易得到纯品,且分离后不易收集,故目前已很少应用界面电泳。区带电泳是指在支持物上进行的电泳。支持物将溶液包绕在其网孔中,防止溶液自由移动。通电后各种带电粒子可以形成许多清晰的区带。故区带电泳的分离效果远比界面电泳的好。电泳后放入凝胶成像仪调整曝光和亮度后,就可以看到清晰的电泳条带照片,DNA条带离点样孔越远,DNA片段越小,具体大小应参考Marker的大小。根据支持物的不同,常用的区带电泳又可分为纸上电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳等。
分子生物实验电泳槽使用方法
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳是指带电粒子在电场中的运动,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,在电场中运动速度不同。根据这一特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备,在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义。若将两个电极插在电解质溶液中,通上直流电,正离子则向负极移动,而负离子向正极移动,这种现象就是我们熟悉的电泳现象,也称“电泳”。
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