ELISA试剂盒——会出现的问题及解决办法

阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因：微孔中的试剂未能充分混合。

解决办法： 试剂加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因：洗板过程发生问题。

解决办法：请随时监控洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。

解决办法：请使用已校正过的移液***，并确保其与吸头之间有高度密合性。

Elisa试剂盒操作步骤

1、固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。

2、包被或抗原的挑选：将或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。

3、 酶标记作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法'，在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。

4、酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。

Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案

不正常的标准曲线

1  错误的方法重悬标准品  加入正确量的溶液重悬标准品，重悬充分

2  标准品稀释错误  按照说明书要求稀释标准品

3  标准品污染  使用一次性的灭菌吸头， 标准品贮存于2-8 ℃

4  错误的倍比稀释步骤  按照说明书倍比稀释标准品

5  波长选择错误 TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而 前者比色波长为450nm，后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。

6  标准品混用  不同批号试剂勿混用

7  试剂盒在运输途中时间太长，温度太高，标准品失活  尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温

8  ELISA未终止而直接检测450nm和620nm TMB显色需终止后检测，否则会出现620nm比450nm读数高的现象。（数值仍有梯度规律）