透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是使用zui为广泛的一类电镜。通过发射电子束从而穿过超薄的样品，同时与样本相互作用，既而形成图像。透射电镜具有分辨率高和放大倍数高的优点。其分辨率为0.1-0.2nm，放大倍数为几万到几十万倍。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位，并且可以通过荧光强度对检测蛋白的表达量进行半定量分析。目前透射电镜已经广泛的应用到癌zheng研究，病毒学研究，微生物学，细胞学研究等生物领域。

透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备超薄切片(通常为50-100 nm)。组织、细胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法来显示，其化学基础是利用guo碘酸的氧化作用，打开碳链形成醛，生成的醛基与Schiff试剂中的无色品红反应形成紫红色化合物。要在机体si亡后的数分钟内取材，组织块要小(1mm3以内)，常用戊er醛和锇suan双重固定，包埋介质包埋，用超薄切片机切成薄片，再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。

 病理实验外包，南京英瀚斯可开展冰冻切片荧光染色1.  冰冻切片室温晾干15 min，可用含10%正常山羊的PBS室温封闭切片1小时（此步可不洗）。2.  滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液（的量视组织大小而定，原则是可以均匀覆盖组织面，且保证整个过程中不会使组织干涸）。3.  将切片放在加了PBS的组化湿盒，室温孵育2小时或4℃过夜。4.  第二天先将湿盒放到37℃回温1 h，然后吸取片上的一抗进行回收，将切片插入到小染缸PBS冲洗。5.  滴加用PBS稀释好的二抗（避光）置于分子杂交箱中37℃孵育1小时。回收二抗，切片置于染缸内，PBS洗5 min×3次。6.  滴加DAPI工作液染核，室温10~20 min（工作浓度0.1%染色15 min）。7.  回收DAPI，滴加5-10 μl 抗荧光衰减封或中性树胶，用处理干净的盖玻片封片，即可到荧光显微镜或者共聚焦显微镜下。它是呼吸链中吡定—核苷结构酶系统的质子受体,与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。8.  做好的片放在切片盒内，置于4℃冰箱，可保存一周左右。

 病理实验外包，病理染色切片常见问题及解决方法：1.切片粘在切片刀不易取下

●原因：切片时有静电作用，产生静电吸引，在冬季或气候干燥时常出现这种情况。

●解决方法：可用加湿器。以增加空气中的水分，而减少静电作用。

2.切片厚薄不均

●原因：①切片微动部分失灵，齿轮跳格。②蜡块太大，过硬，转动时刀刃受震动。

●解决方法：①修理切片机失灵的部分，调整螺旋。加机油润滑零件，必要时需请技术人员调整切片机。②如蜡块过大，以后取材时注意取材的大小。蜡块组织过硬，可返回水中浸泡，再重新脱水和包埋。