如何预防细胞老化?1. 防止细胞老化主要还是要做到勤观察、勤换液、勤传代、勤保种,特别是传代,不能等细胞太密了之后传,一般细胞建议长到70%融合度传代好。2.在间充质细胞培养时必然要进行消化,但是消化对细胞的表面蛋白质有很强的破坏作用,因此不能长时间进行消化并且在选择消化酶时也要选择较为合适pH和浓度,不然就会使细胞老化或者分化。2. 在开始养细胞传代时,也要特别注意冻存细胞,以保持细胞有种子存在,可以有效避免细胞损伤。
支原体污染细胞污染可分为细菌、霉菌、酵母菌、支原体污染,其中支原体污染发生的概率>50%。支原体(Mycoplasma) 是小的原核生物,约0.1-0.3μm,可穿透0.22-0.45 μm 过滤膜 (BI经过3次0.1μm滤膜并且检测支原体)。支原体污染棘手的原因之一是没有如其他污染源“立即可辨”的现象,支原体污染侵袭细胞但是并不一定致死。如果您的细胞出现如下状态:增殖变慢、形态变差、培养液变黄但是没有浑浊,说明您的细胞可能正遭受支原体的摧残!
多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了太肽外,这点都会发生, 在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用超声处理。溶解仍有问题, 加少量稀氨水,会便于溶解。要长期保存多肽试剂, 应该冻干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。 多肽易受细菌降解,应用无菌纯化水溶解。
多肽的稳定性研究,引起多肽不稳定的原因:(1)水解:多肽中的肽键易水解断裂。由Asp参与形成的肽键比其它肽键更易断裂,尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽键。(2)形成错误的二硫键:二硫键之间或二硫键与巯基之间发生交换可形成错误的二硫键,导致三级结构改变和活性丧失。(3)消旋: 除Gly外,所有氨基酸残基的α碳原子都是手性的,易在碱催化下发生消旋反应。其中Asp残基易发生消旋反应。
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