现代化分析仪上通常有分析程序供用户设定,包括样品量、试剂量、波长、分析方式和延迟时间、测试时间的设定等。下面我们就延迟时间和加样程序的设定来说明正确使用分析参数对于正确运用试剂的作用,比如肌酐测定法,我们在设定延迟时间应注意到在碱性条件下50秒前首先快速与乙酰等快速反应物质产生红色化合物,而在120秒后碱性又能与慢反应物质产生阳性干扰,解决办法:好设定延迟时间为50-60秒之间。
30年前,我国临床主要采用固定时间测定酶活性,而近20年我国临床生化检测跨越了国外采用分光光度法连续监测酶活性的手工阶段,而一步到位引进自动生化分析仪采用动力学法连续监测酶活性。新方法的采用,使可分析的酶范围扩大,测定准确度和精密度提高,为临床提供更广泛的信息;同时自动化分析促进了酶法对代谢物测定的研究与应用,许多体内的生化反应被模拟,过去采用强碱、强酸、火焰等比较激烈的化学反应被摒弃,代之以温和、快捷、无污染的代谢物酶法测定。
3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验实验步骤:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如Tris或者甘氨酸),可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算:蛋白质量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白质的毫摩尔数。
2. 在打开之前,平衡生物素至室温。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超纯水中,加入足够量浓度的生物素,一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数,对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍,或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室温30分钟,或冰上放置2小时。
4. 用30 ml PBS预洗纯化柱,上样,加入与欲收集量相同的缓冲液,收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。
水封存也可使某些容易挥发的试剂减少损耗
水封存也可使某些容易挥发的试剂减少损耗。如:在装有液态、的试剂中加一薄层水,就能大大减少挥发损失和空气污染。实验室中无机、有机试剂种类繁多,性质各异,应注意合理分类存放。有机物、无机物分开,普通药品和危险的分开,氧化剂和物、还原剂分解、易挥发性酸和碱分开。做到以上几个分开,一可避免药品间的不良影响,二则即使有意外事故发生,也能免除药品的相互作用,而产生更大的隐患。
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