HEPES粉末的制备步骤:乙烯基磺酸或乙烯基磺酸盐与N-羟乙基哌嗪加成反应制备4-羟乙基哌嗪磺酸盐；用酸化剂将4-羟乙基哌嗪乙磺酸盐转化为4-羟乙基哌嗪乙磺酸和相应酸化剂的盐，得到酸化母液；对酸化母液进行结晶，除-去相应酸化剂的盐分，得到处理后的酸化母液；在酸化母液中加入可溶性钡盐或钙盐，除-去残留的硫酸盐，蒸发浓缩，得到HEPES初级提纯产物；初级纯化产物用小分子醇洗涤，干燥得到粉末。

用这种方法不但可以生产出高纯度HEPES，而且纯化成本低，制备工艺简单，易操作，无污染。德晟生化是一家生产生物缓冲剂的，2005年成立至今在生物缓冲剂的研发及生产上已经拥有很丰富的经验，目前所生产的生物缓冲剂有十几种，如有需要欢迎前往咨询购买。

HEPES（4-2-羟乙基-1-哌嗪基-乙磺酸）是一种用于制备缓冲溶液的有-机物质，广泛用于细-胞培养中，以保持稳定的生理 pH 值，它在 20°C 时的 pKa 为 7.55。HEPES 用于保护冷冻酶溶液免受冷冻诱导的 pH 值变化。考虑到 HEPES 的光毒性（如果暴露在环境光下会产生），所以这种缓冲剂配置成溶液后要保存在暗一点的环境中，才能保持后续实验使用时，正常的发挥作用。

生物缓冲剂HEPES粉末

HEPES 在细-胞培养中频繁地使用，因为它已被证明是生理 pH 值的良好维持剂，它比其他缓冲液（如碳酸盐缓冲液）具有优势，此外它还可以避免由于二氧化碳释放而引起的细-胞变化生长。HEPES的PH值它随温度下降而降低，但磷酸盐和碳酸氢盐缓冲液的解离常数 pK 几乎不随温度变化。HEPES 的行为类似于水，当温度降低时，其解离常数会降低， HEPES 可以用于维持酶在低温下的结构和功能。

hepes用于做培养基，体外受精过程需要从体内取出成熟的卵母细胞和，在离体条件下培养一段时间，然后进行人工授精，这些过程中由于脱离了母体的条件，需要用到各类的培养液模拟体内的生理环境，今天就来给大家介绍一外受精过程中常用的一些培养基：

卵母细胞的培养：

目前对牛卵母细胞体外成熟的研究主要集中在以TCM199为基础培养液，再添加，，液， 生长因子及颗粒细胞等成分来模拟卵母细胞体内成熟的环境以及各种成分间的相互作用以期达到与体内相当的成熟效果。常用的卵母细胞成熟培养液配方：基础培养液为TCM-199，添加10%FCS，25mM Hepes、0.55mg/ml酸钠及100IU青、链；

生物缓冲剂HEPES有很多应用，我们较常所了解的有细胞培养液、PH缓冲液、氧化还原研究等方面的应用，接下来我们来介绍它在Cu(II)-SA 复合物之间的电子转移、金属离子研究等方向都有哪些应用。

HEPES 缓冲液的存在使 Cu(II)-SA 复合物的还原电流加倍

使用各种电化学技术在悬滴电极 (HMDE) 上进行测量。 HEPES 缓冲液 (pH 8.0) 的存在使 Cu(II)-SA 复合物的还原电流加倍，而还原电位转移到更正值（约 50 mV）。结果表明，HEPES 缓冲液的存在促进了还原过程中电极和吸附的 Cu(II)-SA 复合物之间的电子转移。使用双步电位计时库仑法进行的实验表明，无论是否存在HEPES 缓冲液，Cu(II)-SA 复合物的表面覆盖率保持不变（在 9 和 10.5 × 10-11 mol cm-2 之间）。