冷冻保护剂又是什么呢？它主要用于在低温保存生物样品过程中降低细胞的冷损伤。目前，常用的冷冻保护剂主要分为渗透性的低温保护剂和非渗透性的低温保护剂２大类。渗透性的低温保护剂是指在低温保护剂添加到细胞悬浮液后，可以渗透到细胞膜内部的来置换出细胞的水分。渗透性低温保护剂主要有甘油、DMSO、丙二醇、乙二醇等。非渗透性低温保护剂是指不能渗透到细胞膜内部。常见的非渗透性低温保护剂有海藻糖、葡聚糖等。此外近年来，也经常使用抗冻蛋白作为新型的低温保护剂。

程序降温仪是一种，的温变速率可调的冷冻系统，现已广泛应用于轻工、农、医、基础生物研究等各个领域中，用于组织库、细胞、细胞，动、植物细胞、心肌细胞等的冻存。全新设计的一体化Cryobox系统采用了的温控技术和液氮分散技术，使程控降温过程均一稳定，可进行IQ/OQ操作，有效满足GLP实验室的需要。生物样品的冻存取决于冷冻的速率，准确的温度控制和合理的温度梯度（+50℃-180℃）。当温度降至-180℃时，大部分生物样品可转移至液氮中长期保存。


在细胞冻存的过程中，样本内水分会从液相转变为固相，水分也随之散失，导致细胞内盐、代谢物浓度改变，进而造成渗透压失衡，直接影响冻存细胞的复苏。同时冷冻的速率太快或者太慢，容易导致细胞内水分丧失或形成大冰晶，都不利于细胞存活。另外，生物样本内水分的相变过程也伴随着潜热释放的现象，在从液相转变为固相时会释放出大量热量，使样本温度瞬速上升。

步骤：(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、，逐滴加入二亚砜 (DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞，用加的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.  1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(DMSOzui后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。