消除污染的操作步骤

1、清理废液缸并且对废液缸用有效氯含量为 2000mg/L 消毒水浸泡消除核酸污染；

2、用有效氯含量为 2000mg/L 消毒水对移液进行擦洗，关键部位为移液前端易污染部位，清洁干净后用洁净水再擦拭一遍；

3、将离心管架、扩增管架、扩增管架底板、吸嘴盒及其他相关物品用有效氯含量为 500mg/L 的消毒水浸泡 2 小时后，用清水冲洗干净晾干后使用；

4、对污染区域内的设备如扩增仪、全自动提取仪等，使用核酸气溶胶污染清除剂进行反复处理；对生物安全柜等含有空气过滤系统的设备，需更换过滤网；

5、用有效氯含量为 500mg/L 的消毒液对整个实验室（地板、墙面、天花板、门、窗户等地方）进行清洁，并且用用有效氯含量为 1000mg/L的消毒水对实验室进行喷雾消毒(重点部位为操作区)，有效降解空气中的气溶胶与附着在实验台表面的核酸污染；同时加大通风量（内循环无用，尽可能外循环）；

6、待污染区域及设备器件清理完成后，常用设备和操作台面使用移动紫外消毒车近距离辐照1小时；实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。

步骤1- 6 必须坚持每天进行，确保消除实验室污染；

PCR实验室为什么会存在气溶胶污染？有什么危害？

PCR实验室中的气溶胶污染来源于两个过程：样本制备过程和PCR扩增过程。

在样本制备过程中，样本液体面与空气摩擦就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管、开盖时、吸样时及加样器的反复吸样都可能形成气溶胶而污染；PCR扩增过程可以引起实验室中扩增产物的累积，通常一次典型的PCR扩增可以产生109拷贝的靶序列，如果气溶胶化，甚至的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。

如果不加以控制，在短期内累积的气溶胶化扩增产物就会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统，造成严重的实验室污染，导致检验样本出现假阳性结果，使临床做出错误的判断和决策，进而引发后续一系列的事故和恐慌。

PCR管

（1）渗漏密闭性：将n个PCR管加入半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。

（2）离心密闭性：将n个PCR管加入半量纯水，放入离心机，1000 rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格。

（3）热密闭性：将n个PCR管加入半量纯水，盖好盖子称重后放入PCR仪，设置一个常用的PCR程序，程序运行完毕后，再进行称重，PCR管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。

（4）冷密闭性：将n个PCR管加入半量纯水，放入-20℃冰箱，24h，离心管未变形，管盖未崩开未漏液为合格。

（5）污染物质检：将n个PCR管加入半量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置5min，作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。

（6）抑制物质检：将n个PCR管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min，然后进行提取;RNA核酸，DNA核酸，室温静置5min，作为模板进行扩增，qPCR扩增未被抑制为合格。

（7）空白荧光通透性：对于qPCR,需要考察PCR管是否有非特异性荧光信号，将n个空PCR管，盖好盖子后放入PCR仪，设置一个常用的PCR程序，程序运行完毕后，qPCR无扩增为合格。

（8）阳性荧光通透性：对于qPCR,还需要考察PCR管是否会抑制荧光的通透性，将n个含弱阳性样品和扩增试剂的PCR管，与确认无荧光干扰的PCR管，盖好盖子后放入PCR仪一同扩增，设置一个常用的PCR程序，程序运行完毕后，qPCR扩增未被抑制为合格。