实验操作小贴士

1、实验应在超净工作台或者生物安全柜内进行；

2、实验的过程中选择尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染；

3、装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染；需要高温加热的样本，可采用封口膜进行PCR管盖密封，避免管盖应受热而发生弹开；

4、吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守“慢吸快打”原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染；

5、PCR试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数和反复使用过程中的试剂污染；多样本PCR反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量保证单人单管，实现完全闭管操作；

6、实验试剂应与样品和PCR产物分开保存，不应放于同处；

7、PCR扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套或者塑封袋将产物反应管包裹丢弃，保证管盖紧闭；

8、实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌，尖、反应管等实验耗材应一次性使用。

实验室的建设有布局、工程材料、通风系统、排风系统、压力梯度、建筑工艺等几个关键点

墙面：主体结构建议使用彩钢板围护，墙面光洁、不产尘积尘、耐腐蚀，易清洁、无缝隙；

地面：建议使用PVC卷材，、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏；

阴阳角：均采用圆弧角密封处理，不易积尘；

传递窗：必须设置互锁(机械或电子)；

主入口：实验室主入口设有门禁管理；

通风系统：避免交叉污染；

排风系统：宜设置过滤器净化；

气流组织：采用上送下排形式；

压力梯度：压力梯度控制通过微压差计及精密自控系统控制；

排水系统：排水系统应不渗漏，下水应有防回流设计。

应急用电：应有紧急发电设备或双回路供电。关键设备应配备足够的UPS并接入设备。

防护设施：设置洗眼装置，必要时应有应急喷淋装置；设置非接触式操作理念(感应式水、感应式自动门、互锁传递窗等)。

pcr辅料质检的基本原则

辅料的质检通常是在新一批的辅料到实验室后统一做一次或者定期（半年或1年）做，因此质检就包含了验货和质检2个部分。由于辅料的质检没有一个统一的标准，一般由各实验室自行制定，可简可繁，这里提出一些方法供大家参考和批评指正。

1.外包装检查：外包装应完整无损无污，标识清楚，检查品名、品牌，货号，规格、生产日期，有效期、保存条件等信息。

2.内包装检查：内包装物品应与外包装标识一致，检查是否有破损，泄漏，内容物是否齐全，是否有相应的使用说明书等。

3.性能质检：检测试剂耗材是否与其性能一致，比如吸头的准确性和气密性等

4.污染物质检：检测试剂耗材是否被常规检测项目的待检物污染，这种污染可能是物品生产环节，也可能是运输或实验室的保存过程中被污染。

5.抑制物质检：检测试剂耗材中是否存在PCR反应的抑制物，比如核酸酶。

pcr常见辅料的质检

辅料的质检应结合实际工作中可能用到的场景，并非越苛刻越好，需要每个实验室结合自身情况来设计和调整文中提到的参数。

1.离心管

（1）渗漏密闭性：将n个离心管加入半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。

（2）离心密闭性：将n个离心管加入半量纯水，放入离心机，10000 rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格。

（3）热密闭性：将n个离心管加入半量纯水，盖好盖子称重后放入金属浴中，65℃或90℃（巴氏消毒），30min，再进行称重，离心管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。

（4）冷密闭性：将n个离心管加入半量纯水，放入-20℃冰箱，24h，离心管未变形，管盖未崩开未漏液为合格。

（5）污染物质检：将n个离心管分别加入半量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置5min，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。

（6）抑制物质检：将n个离心管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min，然后进行提取;RNA核酸，DNA核酸，室温静置5min，作为模板进行扩增，qPCR扩增未被抑制为合格。