低温生物菌种——保存方法介紹

脱水存法

①沙土保存法，能产孢子的细菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。

② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。

③ 石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。

生物有机肥产品生产使用现状

细菌类生产用除常见的芽孢外， 还出现了高地芽孢菌、 类干酪乳菌、 屎肠球菌、 盐居固氮菌等新， 其中， 高地芽孢菌和盐居固氮菌普遍存在于土壤环境中， 未见致病性报道， 属风险一级； 类干酪乳菌又名为副干酪乳菌， 虽为风险一级 ， 但有从动物受伤部位分离到该菌的报道；屎肠球菌属于乳酸菌类，属风险二级， 建议谨慎使用。伯克霍尔德氏菌是一些具有生物防治、 促进植物生长和生物修复等功能的细菌， 但同时也是可以引起鼻疽、 类鼻疽病的致病菌， 因此真菌伯克霍尔德氏菌属于风险三级， 需做致病性试验， 建议慎用或不用。真菌类生产用菌株主要为丝状真菌和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 长枝木霉、 绿色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉红螺旋聚孢霉、 金龟子绿僵菌等属于生物安全风险等级二级， 需按照NY/T 1109－2017 《微生物肥料生物安全通用技术准则》 进行毒理学测试。酵母菌主要以酿酒酵母为主， 还有少量东方伊萨酵母、杰丁塞伯林德纳氏酵母 （原产朊假丝酵母、 杰丁毕赤酵母）、 膜醭毕赤酵母、 解脂耶罗威亚酵母等， 属于生物安全风险等级一级， 可免做毒理学试验。

低温生物菌种——特点介绍

菌种的有效性

菌种的有效性微生物是微生物肥料的***，这些菌种是针对不同作物和土壤类型，通过人工筛选或生物工程技术选育、改造并经过大量科学试验后，获得的优良菌株。由于***菌种或菌株生理生化功能的差异，不同微生物肥料功效也不一致。以根瘤菌为例，菌株固氮能力差异很大，有的菌株甚至不具固氮能力。

低温生物菌种——常用菌种介绍

巨大芽孢菌

巨大芽孢菌(Bacillus megaterium de Bary，1884)：杆状，末端圆，单个或呈短链排列。1.2-1.5×2.0-4.0微米，严格好氧，能运动，革兰氏阳性，芽孢1.0-1.2×1.5-2.0微米，椭圆形，中生或次端生 。芽孢从椭圆形到长形不等；不能生成乙酰；菌株能运动，但运动缓慢，需要游离氧；发酵葡萄糖产酸；DNA的G+C含量为36%-38%。 

接触酶阳性；水解淀粉和酪素；V-P反应和卵黄反应阴性。琼脂平板微波状，平隆，浅黄白色转浅灰白色至浅灰褐色，表面略有光泽，在马铃薯块上生长，由浅黄灰色变为灰色。液化明胶慢、胨化牛奶、水解淀粉。 

工业上用于生产葡萄糖异构酶，巨大芽孢菌在回收贵重金属方面有着重要作用，还能降解土壤中难溶的含磷化合物，使之成为作物能吸收的可溶物巨大芽孢菌与球形芽孢菌混合培养时具有固氮增效作用，非常适合制成微生物肥料。 

巨大芽孢菌作为一种重要解磷细菌被广泛应用于农业生产中，将其优化培养制成菌剂肥料使用，可以提高土壤肥质，增产增收。近年来，随着微生物肥料在农业上的广泛应用，巨大芽孢菌以其在土壤中的解磷作用而被深入研究，是工业上生产解磷固钾肥的常用菌种，同时在水体处理和提高烟叶发酵增香效果上有特别的作用。 

巨大芽孢菌能降解有机磷药和曲霉。张广志等人从长期受有机磷药污染的土壤中分离出3株能降解胺磷和芽孢菌，其中2株为巨大芽孢菌。孙丰芹发现巨大芽孢菌TRS-3对曲霉AFB1有去除作用，其发酵上清液降解AFB1的能力达到78.55%。