东莞市龙晟生物科技有限公司位于广东省东莞市大岭山镇。公司拥有自己的产品研发部、生产基地以及销售部门，主要研发生产各类食品安全快速检测（KJ201710）产品：农药残留检测剂、液体酶、丁酰胆碱酯酶、乙酰胆碱酯酶。

1。范围

本方法适用于油菜、疲菜、芹菜、韭荣等农药残留的快速测定。

酶抑制（率）法（分光光度法）

2。原理

在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412mm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。

3。试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 668规定的二级水。

3。1试剂

3.1.1酮（CH；COCH ) .

3.1.2 磷酸氢二钾（KHPO4)

3.1.3磷酸二氢钾（KHPO4)

3.1.4 5,5- (CHN2Ogs2）。

3.1.5 碳酸氢钠（NaHCO3)

3.1.6碘化乙酰疏代胆碱（ CHI,INOS ) .

3.1.7 pH8.0缓冲溶液：分别称取11.9 g无水磷酸氢二钾及3.2 g磷酸二氢钾，溶解于1000 mL水中，混匀。

3.1.8 显色剂：分别取160 mg 5,（2-硝基ben甲酸） (DTNB）和15.6 mg碳酸氢钠，用

20 mL緩沖溶液溶解， 4℃冰箱中保存。

3.1.9 底物：取125 mg碘化乙酰liu代胆碱，加15 mL蒸馏水溶解，摇匀后置于4 ℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。

3.1.10 乙酰胆碱酯酶： 4℃冰箱中保存备用。

4。油菜、菠菜加标实验

取空白试样，擦去表面泥土，剪成1 cn左右见方碎片，称取5份试样各3 g（***至0.1 g）放入小离心管中，分别加入检出限水平的有机磷和氨基甲酸酯类标准中间液B(1 ug/mL) (3.3.4），加入10 ml缓沖溶液（3.1.7) ，振摇50次，静置2 mir以上，倒出提取液，静置3 mir-5 min待用。

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