武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。扫描电子显微镜的电子束不穿过样品，仅以电子束尽量聚焦在样本的一小块地方，然后一行一行地扫描样本。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供的生物技术服务。

在识别出酵母自噬的机制之后，依然还有一个关键问题。其他的生物里有没有对应的机制来控制自噬过程呢？很快人们发现，我们细胞里也有几乎一样的机制在运行。现在我们有了探索人体内细胞自噬所必需的研究工具。

武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士创办。冷冻扫描电镜技术服务是克服样品含水问题的一个快速、可靠和有效的方法。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供生物技术服务。

图象观察：当束流调到所需值后，终推进样品杆，用样品平移传动装置把样品座调到观察位置，即可进行图象观察。自噬体形成后，可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合（这种情况不是必然要发生的）。首先在透射电镜低倍下观察，选择感兴趣的视场，并将其移到荧屏中心，然后调节透射电镜中间镜电流确定放大倍数，调节透射电镜物镜电流使荧光屏上的图象聚焦至清晰。

武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士创办。冷固定：将样本放在液态的中速冻，这样水不会结晶，而形成非晶体的冰。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供生物技术服务。

扫描电镜使用步骤　　一、开机(电源开关和准备开关均为打开状态)

　　1、开水(系统不报可);

　　2、开扫描电镜总电源;

　　3、电气柜后面开关打开，将自动/手动(AUTO/MAN)开关拔到自动(AUTO)的位置，此时电炉进行加热;

　　4、抽真空30分钟后，断开准备开关;

　　5、开扫描电镜系统软件;

　　6、打开主机前面面板上的电气柜开关，抽真空10分钟。

一、细胞取材流程及要求 取材流程：细胞直接刮下（不可胰酶消化，会造成细胞损伤），细胞悬

液离心，弃上清，PBS 洗 2 次（敏感的细胞直接固定，不洗，否则会造成

细胞器损伤），低速（1000-3000rpm）离心成团，加入组织及细胞电镜 2.5%固定 液 4℃过夜后快递。悬浮细胞、菌液可直接视为 细胞悬浮液操作。固体培养基培养的菌可直接将菌落挑到 PBS 中，后续 操作一致。

取材要求： 1、细胞数量充足（6cm 或 10cm 皿长满），离心后在 ep 管中绿豆大小； 2、缓冲液、固定液等 PH 值 7.3-7.4，4℃提前预冷；高速的电子的波长比可见光的波长短（波粒二象性），而显微镜的分辨率受其使用的波长的限制，因此电子显微镜的理论分辨率（约0。 3、贴壁细胞连着培养基用细胞刮斜着朝一个方向快速铲下，不要反复来回刮； 4、细胞悬液转入离心管，1000-3000rpm

离心成团，弃上清，加 PBS，将细胞转入 1.5ml 尖 头 ep 管，再次离心后弃上清。再加

PBS 重复上述步骤，后加

2.5%固定，4℃保存。 操作轻柔，尽量保证细胞不散开。(转速及时间请结合细胞情况，尽量低转速、短时间，以 细胞离心成团为准！（PBS 清洗时间过长，易造成细胞损伤)；