武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供的生物技术服务。

透射电子显微镜（Transmission electron microscope，缩写TEM），简称透射电镜 [1]  ，是把经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。6、不要在关控制台电源的同时，立刻放气到样品室和电子***，以免引起电子***探测器上残余高压放电，损坏灯丝及闪烁体。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像，影像将在放大、聚焦后在成像器件（如荧光屏、胶片、以及感光耦合组件）上显示出来。

透射电镜取材的基本要求

一、动物组织取材流程及要求 取材流程：动物或断头急性处死，快速解剖出所需的或

组织，生理盐水简单冲洗血液及组织液，置于液滴中，用 锋利的刀片按要求将组织切成 1mm3左右小块，固定于 2.5% 固定液中。 取材要求： 1、位置：肝、肺、脾等无需定位组织取 1mm3组织，3-5 块；细胞自噬(autophagyorautophagocytosis)：又称为Ⅱ型细胞，是细胞在自噬相关基因(autophagyrelatedgene，Atg)的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。需要 定位组织如骨骼肌、、肠、血管、胰岛等组织取材大小为 0.5mm × 1mm×3mm 左右的长条状，且保证观察结构在组织块中。 2、操作：试剂、容器、器械提前 4℃预冷；组织离体后，1min 内 浸入固定液。取材时，可提前准备一个载玻片（硬卡纸），

一、细胞取材流程及要求 取材流程：细胞直接刮下（不可胰酶消化，会造成细胞损伤），细胞悬

液离心，弃上清，PBS 洗 2 次（敏感的细胞直接固定，不洗，否则会造成

细胞器损伤），低速（1000-3000rpm）离心成团，加入组织及细胞电镜 2.5%固定 液 4℃过夜后快递。悬浮细胞、菌液可直接视为 细胞悬浮液操作。固体培养基培养的菌可直接将菌落挑到 PBS 中，后续 操作一致。

取材要求： 1、细胞数量充足（6cm 或 10cm 皿长满），离心后在 ep 管中绿豆大小； 2、缓冲液、固定液等 PH 值 7.3-7.4，4℃提前预冷； 3、贴壁细胞连着培养基用细胞刮斜着朝一个方向快速铲下，不要反复来回刮；一般经15～20min后，真空度即可达到10^-4~10^-5Torr，持高真空指示灯亮后，透射电镜即可开始使用。 4、细胞悬液转入离心管，1000-3000rpm

离心成团，弃上清，加 PBS，将细胞转入 1.5ml 尖 头 ep 管，再次离心后弃上清。再加

PBS 重复上述步骤，后加

2.5%固定，4℃保存。 操作轻柔，尽量保证细胞不散开。(转速及时间请结合细胞情况，尽量低转速、短时间，以 细胞离心成团为准！（PBS 清洗时间过长，易造成细胞损伤)；