武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的***产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
ELISA试剂盒操作步骤
1. 加样:标准品设定5个浓度点10个孔,每个浓度设定平行孔,加入50微升不同浓度的标准品,空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔,在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品***终稀释度为5倍)。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗1体反应中可出现交叉反应。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的***产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域
7.为什么有的试剂盒是采用竞争ELISA法?
小分子抗原或半抗原因为缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗1体夹心法进行测定,可以采用竞争法。其原理是标本中的抗原和固相载体上的抗原竞争生物素化抗1体上的结合位点,标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的生物素化抗1体愈少,***的显色也愈浅,即显色深浅与样本中的抗原浓度成反比。通过绘制标准曲线,检测未知浓度的OD值,对应标准曲线找欲测目标物浓度。小分子激1素等ELISA测定多用此法。
IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab)。每个Fab都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称Fc段,无抗1体活性,但具有IgG特有的抗原性。
IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段,一个Fab双体,称F(ab')2,能和两个相同的抗原结合;另一片段类似Fc,随后被分解成小分子多肽,无生物活性。
IgM是由五个单体组成的五聚体,含 10个重链和10个轻链,具有10个抗原结合价,由于空间位置的影响,只表现为五个抗原结合价。IgM分子量约为900000,IgG分子量约为150000。
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