武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的***产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

本实验选择豌豆为材料，豌豆（Pisumsativum）属豆科植物，是粮食、饲料和重要的蔬菜作物，也是遗传学家和植物生理学家感兴趣和乐于采用的实验植物，豌豆的根、茎、子叶、下胚轴、上胚轴、花芽等外植体，皆可形成愈伤组织，其中茎尖、幼胚、幼叶等器1官可成功的再生成植株。（4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。茎尖培养可包括小至十几微米的茎尖分生组织（生长点）和大至几十毫米的茎尖或更大的芽培养。在实践应用上，常采用生长点的培养使患病植物去病毒，以达到挽救优良品种，提高产量和质量之目的。

3、染色弱 原因 解决办法 抗1体浓度过低，孵育时间过短 提高抗1体浓度，孵育时间不能少于60分钟 试剂超过有效使用期 及时更换试剂 操作中，滴加试剂时缓冲液未沥干，致 使试剂稀释 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液（但防止切片干燥） 室温太低，低于15℃ 若室温低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟（或4℃冰 箱过夜） 蛋白封闭过度 封闭时间不要超过10分钟 4、染色阴性 原因 解决办法 操作步骤错误 重新试验，设立阳性对照 组织中无抗原 设立阳性对照片，以验证实验结果 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗与二抗种属无误

④ 另取洁净的载玻片，捞起展开的切片，使其位于切片1/3处，另一端（磨边，粗糙的一端）磨面上标记或贴上标签，放于切片架上。

10. 脱蜡复水

   将温箱温度调至65℃，待温度控制在60℃时，将切片连同切片架放入干燥的温箱内3-5小时至蜡熔化。

之后，石蜡切片经脱蜡透明Ⅰ、Ⅱ脱蜡各20min，勿动（防治组织掉）此步为关键步，请轻拿轻放。然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各5min

11． 染色

切片放入苏1木1精中染色约10-30min。

染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。

　在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗1体及酶标抗1体结合，而不再形成'夹心复合物'。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗1体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。第三步，咨询每个试剂盒公司销售的试剂盒的规格包装，发1票，售后，电话，地址以及一些资质情况，避免买到三无产品。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增1高的物质（例如血1清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的1高值。用高亲和力的单克1隆抗1体制备此类试剂可削弱钩状效应。