武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的***产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

1、染色过强 原因 解决办法 抗1体的浓度过高或抗1体孵育时间过长 降低抗1体滴度（一般指浓缩性抗1体）抗1体孵育时间：室温1 小时或4℃过夜 孵育温度过高，孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB 显色时间过长或 DAB 浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准 2、非特异性背景染色 原因 解决办法 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3×5 组织中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长 组织中含内源性生物素 正常非免疫动物血1清再封闭 血1清蛋白封闭不充分 延长血1清蛋白封闭时间

6.组织样本如何处理？

用预冷的PSB (0.01M,pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑1制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。（6）脱水必须***，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象5．透明（环保透明脱蜡液）武汉默沙克纯酒精、二甲本等量混合液15min，二甲本Ⅰ60min、Ⅱ30min（至透明为止）。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。

④ 另取洁净的载玻片，捞起展开的切片，使其位于切片1/3处，另一端（磨边，粗糙的一端）磨面上标记或贴上标签，放于切片架上。

10. 脱蜡复水

   将温箱温度调至65℃，待温度控制在60℃时，将切片连同切片架放入干燥的温箱内3-5小时至蜡熔化。

之后，石蜡切片经脱蜡透明Ⅰ、Ⅱ脱蜡各20min，勿动（防治组织掉）此步为关键步，请轻拿轻放。然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各5min

11． 染色

切片放入苏1木1精中染色约10-30min。

染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。

　在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗1体及酶标抗1体结合，而不再形成'夹心复合物'。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗1体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。确定抗1生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗1生素的培养液培养细胞2～3代。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增1高的物质（例如血1清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的1高值。用高亲和力的单克1隆抗1体制备此类试剂可削弱钩状效应。