PCR的三个反应步骤反复进行,使DNA扩增量呈指数上升。反应终的DNA扩增量可用y=(1+X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数,X表示平均每次的扩增效率,n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%,实际反应初期,靶序列DNA片段的增加呈指数形式,随着PCR产物的逐渐积累,被扩增的DNA片段不再呈指数增加,而进入线性增长期或静止期,即出现“停滞效应”,使平均效率达不到理论值
水浴式PCR仪仪器本身有3个不同温度的水浴,用机械装置将带有反应管的架子移位和升降温度,使温度循环。优点:水为传热介质,温度易恒定,热容量大;反应管形状无特殊要求,温度转换较快扩增效果稳定;具有较高的运行效率,扩增产物特异性好。缺点:高温浴不稳定,水面需用液体石蜡覆盖;改变水浴温度所需时间较长,不易实施复杂程序(如套式PCR)的操作,仪器体积较大;室温影响温度下限。
稳定的温度
PCR扩增仪有各种形状和大小,有些比其他的更复杂,然而,它们都执行相同的基本功能,温度循环。
PCR每个阶段的温度对反应的成功至关重要,因此,PCR扩增仪的温度在各孔之间和整个组之间准确和一致是至关重要的,这被称为均匀性。
为了确保每次使用PCR扩增仪时都有一致的结果,定期测试和校准温度块很重要。有经验的实验室科学家可以使用温度验证套件进行测试,但是任何重新校准都需要由合格的工程师来进行。
因此,强烈建议由合格的工程师定期对仪器进行维护和保养。这将保证PCR扩增仪保持在状态,并以状态工作。这些定期维护和校准活动的记录也将被要求用于实验室质量认证,如ISO17025。