1. 模板核酸模板(靶基因或样品DNA)核酸的量与纯化程度是PCR成败与否的关键环节之一。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。DNA模板提取一般采用异硫酸胍或蛋白酶K法，要防止核糖核酸酶(ribonuclease，RNase)降解RNA。2. 引物PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链作引物。每条引物链的浓度为0.1~1μmol或10-100pmol，以反应所需要的低引物量的浓度为好。3. DNA聚合酶TaqDNA聚合酶基因全长2496个碱基，75~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷酸，在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性和良好的热稳定性，温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都可影响TaqDNA聚合酶的活性。目前，有两种TaqDNA聚合酶供应，一种是从栖热水生中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶


用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪称作原位PCR仪。如病源基因在细胞的位置或目的基因在细胞内的作用位置等。是保持细胞或组织的完整性，使PCR反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶DNA所在位置上进行基因扩增。不但可以检测到靶DNA，又能标出靶序列在细胞内的位置，对于在分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值。主要应用于临床、科研。

下面的步骤是PCR的反应原理，同时也是PCR仪的工作原理。

简单的说，就是通过高温变性，退火复性，延伸三个部分。

双链DNA在一定的环境中，通过在90-95℃变性，形成单链，然后退火降温到40-60℃，

在引物及其他辅助因子的作用下，使其初步结合，再快速升温至70-75℃，在相关酶的催化作用下，合成双链。完成一个扩增循环。

由此我们也可以得出PCR仪的一个主要参数：温度，温度示值是否准确，升温速率的快慢是影响其的一个主要因素。

具体要加什么缓冲液，要加什么引物，以及其他一些辅助因子，后续我们再去了解。