在普通PCR仪的基础上增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统的PCR仪称作荧光定量PCR仪。其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同,只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统得出量化的实时结果输出。把这种PCR仪叫做实时荧光定量PCR仪(qPCR仪)。荧光定量PCR仪有单通道、双通道和多通道。当只用一种荧光探针标记的时候,选用单通道,有多荧光标记的时候用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记的目的基因表达产物,因为一次只能检测一种目的基因的扩增量,需多次扩增才能检测完不同目的基因片段的量。主要用于医学临床检测、生物研发、食品行业、科研院校等机构。
有了PCR技术就好办了,通过PCR技术把这个细胞中的DNA片断扩增1000万倍,这样DNA量就足够作指纹鉴定了。再比如,在医院里检验血液中的某种病毒,有时病毒量(例如有的病毒携带者),通过传统的检查方法费力又费时,这时PCR技术也许就可以帮上忙。可以先选定这种病毒DNA上的一段DNA,设计合适的引物DNA,然后通过PCR技术一扩增很快就可以判断出血样中是否扩增出了大量的DNA,如果是的话,那么就说明血样中带有该种病毒了。PCR方法不但有极高的灵敏度,而且可以同时一次做近百个扩增反应,省时省力。
将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得Ct值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
PCR仪是用来干什么的
简单的来说,就是所采集到的样品含量太低,无法正常的用仪器进行检测分析,所以需要通过PCR仪PCR技术来实现样品扩增。扩增的倍数2N次方。2-4-8-16-32-64-128-256······
通过这个技术,可以用于分子生物学研究:核酸定量分析,基因表达差异分析等等。医学研究:产前诊断,病原体检测如近的等等方面