实验小鼠血浆取材要求

　　血液必须在采血时或采血后立即与剂充分混合。采血时与抗凝剂混合方法：用于血液收集的无菌1mL可以将1mL剂从小瓶吸入，然后将全部剂重新注回小瓶，即在采血前用剂“灌注”采血的。采血后与抗凝剂混合方法：向1.5mL离心管中加入不超过150μL的抗凝剂。在相对离心力14000g下离心血样10-15分。用移液管吸取分离的血浆，并转移到干净的离心管中。可将血浆样本在14000g下再离心2-3分钟，以分离任何剩余的红细胞。将分离好的血浆转移到干净的离心管中。

(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。

(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分钟振荡一次；

(4)去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余组织再消化一次。

(5)4℃1000rpm离心10min，弃上清，加入种植液1重悬，培养箱内差速贴壁30min；

(6)收集上清，台盼蓝染色计数，按6*105cells/孔种入六孔板（种植液1），37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养；

(7)培养第二天，全换液更换为种植液2；

(8)培养第四天，半量换液加入5uM的，24h全量换液；

(9)之后每周换液两次。

在进行研究前，确定应用的探针类型。不同探针类型的优劣势请见上文描述。DNA探针的制备包括了前期的DNA片段分离纯化（或cDNA的）和酶促探针标记，可选随机引物标记法和缺口平移法等。RNA探针的制备包括了转录载体和转录法探针标记。寡核苷酸探针的制备要求先获得合成的寡核苷酸片段，再进行末端标记或加尾法探针标记。但无论采用何种标记探针及标记方法，对探针标记效果需进行终的评估，并准确计算探针浓度。

　技术应用：

　　利用动物模型，科研工作者可以从细胞和分子水平研究的发生和发展过程，对于了解的发病机制和转移机制有重要作用，因此，模型可以作为实验假说和临床假说的实验基础，能为的病因学、发展过程和提供特有的条件。

　　实验流程：

　　模型按照建立的方法及研究目的的不同可分为基因修饰小鼠模型、自发和诱发小鼠模型和移植小鼠模型，本公司可以根据需求提供适于客户研究所必需的模型。