先前的结果表明，双变体HLHS是提高对酸类似物（包括氧代丁酸）的底物亲和力的突变体。较小且极性较小的侧链代替两个组氨酸的存在允许扩大较大疏水供体底物的活性位点并保持催化机制完整。将这两个位置与Asp、Leu、Phe或 Leu上的突变连续组合。此外选择L位，它参与稳定 ThDP 的唑循环，并且还可以通过与比 Leu 更长的碳链残基相互作用来稳定脂肪族底物。创建了五个文库，HLHXDX（或 LX、或 FX 或 LX 或 LX）（表 ）。

结果没有观察到产物的TKgst突变体文库的形成，但观察到具有几种TKgst突变体裂解物(SI) 的产物。文库HLHSLX 提供了多数量的活性TKgst突变体。基于这些结果，对个命中进行了测序，其中个显示Ile代替了Leu。Ile诱导了一个新的ThDP位置，有利于与HL的相互作用（图）。 为了进一步改进，创建另一个库，保留LI和HL，并通过SSM在H位置上创建多样性，希望用非极性残基代替Ser。

在反应条件下，首先对醛的底物适用范围进行了考察（图），包括脂肪族醛和芳基醛。令人高兴的是，各种脂肪族醛也都能以中等到高收率适当地转化，同时反应还显示出广泛的官能团兼容性，如硝基、三氟、、酯、硫醚、卤素等能完整保持。图. 脂肪族醛和芳基醛底物范围接下来，对芳基硼酸底物范围进行了考察（图），可以扩展到、、苯并、苯并、被保护或无保护基团的、-氮杂、二苯并和等芳环骨架。


令人高兴的是，在路易斯酸（Sc(OTf)）的作用下可以顺利进行，并且可以中等收率获得目标产物（图）。图. α-羟基炔基酮产物为了检测该反应出色的官能团兼容性，选择了一系列生物活性分子和分子衍生的醛或者硼酸，在此反应条件下得到终的α-羟基酮衍生物，该方法可成为发现其他生物活性分子的简化途径（图）。图. 生物活性分子和分子修饰为了进一步体现该α-羟基酮衍生物在合成上的应用和转化，做了克级制备反应和大量的应用转化反应，出色的收率展现出工业生产α-羟基酮衍生物的应用潜力和实际应用性