PCR实验室由缓冲区及四个单独的工作区域
缓冲区、试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
PCR实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室关键控制好各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。要严格控制送、排风的比例以保住各实验区的阶梯式压力要求及达到安全排放标准。
4、PCR实验室试剂的操作。
⑴所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。⑵所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。2、样品准备和RNA-PCRRNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。⑷所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。⑸所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。⑺样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
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