固定液的选择:一般采取相似相溶原则1、分离非极性物质时,选用非极性固定液,非极性大的后出峰,小的先出峰2、分离极性物质时,选用极性固定液,极性大的后流出,小的先流出3、极性与非极性混合液时,选择极性固定液,极性大的后出峰,小的先出峰4、对于氢键型的物质,选择极性或者氢键型固定液,不易形成氢键的先流出色谱柱,反之则反5、分离复杂的难分离物质,可选用两种或两种以上的混合固定液。
组织固定注意事项:
组织固定越新鲜越好。组织一经离体,就能及时地固定,这是好的。根据实验,如果要获得某些酶的染色,固定好在组织离体后30秒至1分钟。对于其它达不到些要求是越快越好。
组织固定,组织块不宜过大。凡是需要固定的组织,都不应该太大太厚,这是因为所有的固定液穿透力不够强,浸透度不够快的缘故。如果较大厚的组织,不经处理就进行固定,那么待固定液进入至中间对可能这些组织早就发生自溶了。因此,对于较大的组织,必须***行处理,切成制片材料再行固定,这是佳的处理方法,如遇到胃肠的,则应将其剪开,放平后,再行固定,若非特急病例,好在固定后才取材,因这类组织、粘膜和肌层容易分开,没固定时,难以取得佳制片材料,对于产酶类的如肝0脾等,更要处理好,否则更容易出现自溶现象。
特殊病例或特殊物质应选择特殊的固定液。一般的病例标本,如没特殊的要求,都可以应用甲醛配成的各种固定液来固定。但是,如果要显示毒的包含体时,应用上述的的固定液就不行了,必须采用来固定,显示糖元,可选择无水酒精或来固定组织。固定剂是一种化学语试剂,有液体和固体及之分,平常使用的多为液体,Pearse指出,对每个既定的组织化学方法来说,选用合适的固定方法是极为重要的;在组织化学研究中的准备阶段,不论采用什么固定剂,都必须尽可能确切地知道它们对于各种组织成分反应基团的效用。
甲醛商品名为福尔0马林,一般市售的含甲醛37—40%,由甲醛气体饱和于水而成,比重为1.12。它也可以稳定的固体形式存在,它的成分为高分子量的聚合体,称为多聚甲醛。甲醛溶液较难纯化,在每批市售商品中,都含有不少的杂质如甲0醇,这种在组织化学方法当中,能使酶钝化,影响其反应。甲酸,它可使固定液变酸,在陈列标本或长时间固定的组织,由于酸的作用,往往细胞核染色欠佳。甲醛有效固定作用的要点是,在蛋白质末端基团之间形成交联链。参与甲醛固定蛋白质的基团,主要为氨基,亚氨基及酰氨基,肽,胍基,羟基,SH和芳香环。甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的,因为它能和多种不同的功能基团结合,在多数情况下在其间形成桥键。甲醛有这种交联的功能,也是它的缺点,在用甲醛固定过的组织中,需要做免0疫组化的,往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开,以利于后来的染色。