{微生物检测}微生物接种

将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

接种和分离工具

1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀

常用的接种方法有以下几种：

1、划线接种

这是zui常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。

2、三点接种

在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

3、穿刺接种

在保藏yanyang junzhong或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。在进行junzhong鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的junzhong，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

穿刺接种的两种方法：垂直法和水平法

微生物限度检查

计数方法

   计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和可能数法（Most-Probable-Number Method，简称MPN法）。MPN 法用于微生物计数时jing确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN法可能是更适合的方法。

   供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。

   计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验

   供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

   供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。

   若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。

1.平皿法

   平皿法包括倾注法和涂布法。除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

   培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养3～5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养5～7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，***在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

   菌数报告规则 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告的依据。取zui高的平均菌落数，计算1g、1ml或10c㎡供试品中所含的微生物数，取两位有效数字报告。包括生产型食品微生物(醋酸，酵母菌等)和是食物变质(霉菌，细菌等)和食源病原微生物(大肠菌，肉毒菌等)。

   如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅zui低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 时，以<1 乘以zui低稀释倍数的值报告菌数。

非无菌药品微生物限度标准

非无菌药品微生物限度标准

   非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料、辅料及中药提取物的检验，新药标准制订，进kou药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。厌氧的方法可用物理、化学、生物等办法使培养容器内的氧气部分或全部消除。

   1.制剂通则、品种项下要求无菌的及标示无菌的制剂和原辅料

   应符合无菌检查法规定。

   2.用于手术、严重烧shang、严重创伤的局部给药制剂

   3.非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准见表1。