RNA病毒检测试剂盒产品特点:
1. 冻干粉为逆转录酶和Taq酶的预混液,将RNA逆转录与qPCR扩增两个过程合并,一步完成,减少移液次数、避免交叉污染、操作简单,节约时间。
2. Taq酶具有70°C热启动功能,显著提高试剂盒的特异性和敏感度。
3. 主要组分为冻干粉,4℃保存,储存运输方便,性能稳定。
武汉友名生物(U-MeBiotech)技术有限公司成立于2009年5月18日。公司致力于为广大科研工作者提供品质的生命科学产品和、有效的技术服务。公司对所有岗位员工都经过了严格的培训,对所销售的产品及其使用都比较熟悉。同时,在公司内部定期开展自我提高学习培训,由各岗位员工对所销售的产品进行系统培训学习,并进行严格的考核。这都为公司的化服务提供了有力保障!公司目前主要从事分子生物学,蛋白质研究、细胞学研究,NGS等相关产品的销售及技术服务,同时也开展生物化学原料的合成,实验技术服务。
信使RNA(mRNA)早先发现于1960年,在蛋白质合成过程中负责传递遗传信息、直接指导蛋白质合成,具有以下特点。
1.含量低,占细胞总RNA的1%~5%。
2.种类多,可达105种。不同基因表达不同的mRNA。
3.寿命短,不同mRNA指导合成不同的蛋白质,完成使命后即被降解。细菌mRNA的平均半衰期约为1.5分钟。脊椎动物mRNA的半衰期差异极大,平均约为3小时。
4.长度差异大哺乳动物mRNA长度为5×102~1×105nt原核生物与真核生物的mRNA虽然在结构上有差异,但功能一样,都是指导蛋白质合成的模板。
回收产物的检测
1.紫外分光光度计法检测DNA在OD260处有明显吸收峰,当OD260=1时,相当于大约50 ng/μL双链DNA、40 ng/μL单链DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9时,说明DNA纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液,而是用去离子水,会使比值偏低,因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。
2.SYBR法检测取回收产物1 μL,与1 μL SYBR染料混匀,于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。
3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μL,与10×Loading Buffer混匀,DNA Marker加5 μL,电泳后凝胶成像观察。5 μL DNA Marker相当于每个条带50 ng DNA,观察目的条带亮度大致为Marker的两倍,则大致估算其浓度约为20 ng/μL。
提取DNA常用的方法
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
四.异丙1醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态)
五.表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
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